Azure biosystems 如何选择合适的western Blot成像方法
如何选择合适的western Blot成像方法
最合适的Western blot实验方法取决于您期望获得哪些信息，以下内容将帮助您选择最佳实验方法。
化学发光方法
化学发光western blot是相对容易且灵敏度极高的检测方法，灵敏度可以达到fg级。
分子量差异显著的蛋白，通过电泳可轻松分离，使用“化学发光”检测非常方便。
优势:
劣势:
灵敏度高
容易，实验方案熟悉
兼容胶片和数字成像
半定量分析
酶促反应
仅能进行单一信号采集，上样量控制需要剥离和二次孵育
蛋白凝胶电泳:
检测单一蛋白
确定蛋白有无
检测抗体反应
蛋白纯度分析
检测低丰度蛋白
化学发光，单信号，单蛋白
荧光方法
荧光Western blot使用荧光染料标记的二抗进行检测，印迹膜上的靶标蛋白浓度与荧光信号强度呈线性关系，实现真实可靠的定量分析。荧光染料发射光谱不同，因此在一张 印迹膜上可实现多重检测。在无需剥离和二次孵育条件下，进行上样量质控，分析翻译后修饰蛋白时尤为适用。
荧光western blot使用 红外或者可见荧光染料.
优势:
劣势:
可进行多重检测
定量精准度高
荧光近红外印迹膜可储存，并可重复成像
灵敏度略低于化学发光方法
膜自发荧光导致背景噪音增加
可见荧光检测的优势
当需要同时检测三个蛋白时，可见荧光显然是最佳的选择。可见荧光具备很好的灵活性，有多种可见荧光染料可供选择。如果您正在使用可见荧光染料（发射光谱可被区分）进行 其它实验，很容易将这些染料应用于Western blot实验中。
荧光检测方法，可用于:
同时检测多种蛋白
研究翻译后修饰蛋白
同一印迹膜的上样量质控
多个泳道归一化
精确定量 Western实验
多重荧光，多种蛋白
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