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尿微量白蛋白的检测方法

2021.5.17

  目前,尿微量白蛋白的检测方法主要有:ELISA方法、放射免疫法、化学发光法、免疫透射比浊法以及免疫荧光法。

  ELISA方法灵敏性高,但操作步骤多,等待检测结果时间比较长,需要有专门的实验室、专业人员完成,一般用于大批量标本的检测。不适于少量或单份检测的快速检测。放射免疫法灵敏度高、操作简便,测量和数据处理易于实现自动化。但因其为相对定量及存在放射线辐射、污染问题等应用较少。化学发光法因其特异性、敏感性高、简便快速、无需外来光源,背景噪音低应用广泛,但其选择性差、其发射强度依赖于各种环境因素,需严格控制外界各种因素。免疫透射比浊法试剂较稳定,自动化操作减少了人为误差,但其检测需核实的抗原抗体比例,需预先定值,否则造成误差。免疫荧光法特异性强、敏感性高、操作简便、检测时间短,即可批量检测也可单份检测,是临床上常用的快速定量检测方法。

  (1)尿液标本的采集

  尿常规检查所用的随机尿标本虽常用但不推荐,24小时尿标本不易留取,一般可采用12小时夜尿(计量后取0.5-1ml送化验室);也可采用首次晨尿或第二次尿,但注意尿液应在膀胱内超过3小时。

  测试前应离心后采用上清液。测试尿微量白蛋白的时间:

  1型糖尿病:发病5年或12岁以后,每年测1-3次;

  2型糖尿病:诊断明确时测试,以后1-3次/年。

  仅MAU阳性者:每3个月随访检测。

  (2)尿微量白蛋白的测定

  首先,应多次测定。因为尿中含量的上落较大,单次测定可能会造成偏差。

  如首次测试为阳性则应在3-6个月内再测二次以上,如3次中有二次阳性则为早期肾病。

  (3)检测原理

  依据免疫荧光双抗体夹心法定量检测人尿液标本中的尿微量白蛋白含量。将检测缓冲液和人尿液样本在检测管中进行混合,缓冲液中荧光标记的抗人白蛋白抗体和尿液中的白蛋白抗原结合形成抗原抗体复合物,当混合样本加到检测板样品孔内后,复合物通过层析作用扩散到硝酸纤维素膜的检测线上并被检测线上的人白蛋白抗体所捕获。因此尿液样本中白蛋白含量越高,检测线上复合物积累量越多。荧光抗体的信号反映了被捕获的白蛋白数量。通过免疫荧光检测仪可检测出尿液样本中白蛋白的浓度。检测仪默认的尿微量白蛋白检测结果用mg/L为单位。尿微量白蛋白的检测范围是2~300 mg/L,读数结果可精确到0.01 mg/L。

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