免疫组化 & 病理诊断 （一）
在临床病理诊断中，免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段，从20个世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验室间免疫组化标准化，使免疫组化在病理诊断中发挥最大的辅助作用。
在病理诊断中，随着各种抗体新的用途不断被发现及越来越多的新型抗体的出现，免疫组化在肿瘤诊断及鉴别诊断、分类、预后判断等方面产生了重大的影响。由于免疫组化技术也存在一些局限性，因此，深入研究免疫组化原理和技术，并努力实现规范化的操作，才能充分发挥免疫组化在病理的诊断及鉴别诊断、判断预后、指导临床治疗中的作用。
1 免疫组化技术
观察组织切片中抗原的数量及其在组织中的分布情况，对抗原进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学，由于抗原与抗体特异性结合，因此通过免疫组化使标记抗体的显色剂(酶、荧光素、同位素、金属离子等等)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)。IHC所用标本主要为两大类:组织标本和细胞标本，其中制作组织标本最常用、最基本的方法是石蜡切片。石蜡切片对于组织形态保存好，有利于各种染色对照观察，而且能长期保存;石蜡切片中使用的甲醛固定剂对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
2 免疫组化技术在临床诊断中的作用
目前免疫组化技术应用于临床主要有以下几个方面:
2.1肿瘤良恶性的判断
对于反应性增生还是肿瘤性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的轻链抗体检测B淋巴细胞增生的单克隆或多克隆性来区别。在滤泡反应性增生时，滤泡反应中心的细胞不表达细胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2阴性;而在滤泡性淋巴瘤中，由于90%以上肿瘤性滤泡细胞有bcl-2的高表达，bcl-2阳性。而增殖细胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通过对肿瘤细胞增生的程度作出评价，从而提示增生细胞的良恶性。
2.2 确定肿瘤分期
肿瘤分期是判断预后的一个指标，与是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭密切相关，而通过免疫组化方法可以判断肿瘤是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭。层黏连蛋白和Ⅳ型胶原的单克隆抗体可以清楚的显示基膜的主要成分，用于区分原位癌和浸润癌，一旦上皮性癌突破基膜为浸润癌，未突破基膜为原位癌;显示血管和淋巴管内皮细胞的标记物第八因子相关蛋白、D2-40等则可清楚显示肿瘤对血管或淋巴管的浸润。因此对许多肿瘤的良恶性鉴别及有无血管或淋巴管浸润，免疫组化结果作为主要的鉴别依据。
2.3 细胞属性的判定
通过特定抗体标记出细胞内相应的抗原成分，来判定细胞的属性，确定肿瘤的来源。如细胞角蛋白(CK)是上皮性标记，CK阳性提示肿瘤为上皮源性肿瘤;降钙素抗体是甲状腺髓样癌特有的标记;甲状腺球蛋白(Tg)阳性提示是甲状腺滤泡性癌;前列腺特异性抗原(PAS)仅见于前列腺上皮;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性则提示胶质肿瘤;CD20和CD79a阳性则提示B细胞淋巴瘤;平滑肌肌动蛋白(Actin)阳性提示肿瘤为平滑肌源性;胃肠道间质瘤中原癌基因蛋白产物CD117阳性;血管源性肿瘤中内皮细胞标记物CD34阳性等等。
2.4确定来源不明的转移瘤的原发部位
对于来源不明的转移瘤，用免疫组化技术有助于确定恶性肿瘤的组织学来源，进一步确定原发部位。如角蛋白抗体(CK20)在胃肠道癌、胆管癌、胰腺癌中阳性，而在肺癌、乳腺癌、肾癌中阴性;Tg阳性可考虑甲状腺转移;波形蛋白(Vimentin)阳性支持肉瘤的诊断;前列腺特异性抗原(PAS)阳性可考虑前列腺转移;甲状腺球蛋白阳性可考虑甲状腺滤泡细胞癌;肌动蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、结蛋白(Desmin)、肌红蛋白(Myoglobin)阳性可考虑横纹肌肉瘤;S-100蛋白阳性支持黑色素瘤的诊断;等等这些都为肿瘤的治疗及预后提供了依据。
2.5对“未分化”恶性肿瘤的分类
未分化恶性肿瘤包括癌或肉瘤，在HE切片上由于肿瘤的“未分化”而缺少肿瘤细胞的起源特征不能分类，初步区分组织学类型用非特异性抗体，在其基础上再选用特异性抗体做进一步鉴定。如分化差的癌可显示Vimentin或S-100蛋白，有时淋巴瘤可以表达上皮膜抗原，一些黑色素瘤表现出角蛋白，这同时也强调了在肿瘤诊断中应使用一组抗体而不是单个抗体。
