德国IBL水痘-带状疱疹病毒IgG ELISA试剂盒说明
1、应用范围
此酶免试剂盒可用于人血清和血浆中抗水痘-带状疱疹病毒IgG抗体的体外定性和定量检测。
2、前言说明
水痘是一种由属于疱疹病毒科的水痘带状病毒所引起的急性病毒性疾病。这种众所周知的疾病开始表现为发烧，浑身不舒服，斑丘疹，这种斑丘疹几个小时之后就变成小泡。身上这些脓泡会变硬，要整整3周才能慢慢痊愈。这种疾病很少造成死亡，但是在成年人中，造成死亡最常见的原因是原发性病毒性肺炎，在儿童中是续发性细菌性感染或涉及中枢神经系统的感染。有急性白血病或免疫抑制的儿童感染这种疾病并致死的危险性更高。新生儿在其出生5大10后就可以被感染，在出生前5天或出生后两天被感染的婴儿可发展成严重的无典型特征的水痘，这种水痘有30%的死亡率。而在早孕期感染的婴儿一般不会造成先天性畸形。水痘病毒再活化通常表现为带状疱疹。带状疱疹通常首先表现为单侧剧烈或轻微的局部疼痛。在这种情况下，IgG抗体的浓度就增加了，而IgM抗体的浓度仅在某些情况下才会增加。
3、实验原理
此固相ELISA试剂盒利用的夹心法原理。包被板上包被了抗原。用对人IgG具有特异性的酶标二抗来检测结合到包被抗原的样品特异性抗体。底物反应后，所显示的颜色强度与检测到的IgG特异性抗体的量成正比。样品的结果可直接使用标准曲线得。
4、试剂盒组成：
4×2ml | 标准品A-D | 1；10；30；150U/mL，待用 标准品A=阴性质控 标准品B=临界质控 标准品C=弱阳性质控 标准品D=阳性质控 内含抗水痘病毒的IgG抗体，PBS（磷酸缓冲液），稳定剂。 |
1×14ml | 酶标IgG | 红色，待用。内含过氧酶标记的抗人IgG，蛋白缓冲液，稳定剂。 |
1×12×8 | 包被板 | 可拆，包被有特异性抗原。 |
1×14ml | TMB底物液 | 含TMB |
1×14ml | TMB终止液 | 0.5M的H2SO4 |
1×60ml | 稀释液 | 含PBS缓冲液，＜0.1%NaN3 |
1×60ml | 浓缩洗涤液 | 浓缩型（10×），含PBS缓冲液，吐温20 |
2× | 粘性金属板 | 用于在温育时遮盖包被板 |
1× | 塑料袋 | 用于储存不用的板条 |
5、实验所需材料但试剂盒不提供
1) 移液器，体积：5；50；100；500 µL
2) 校准仪
3) 样品稀释用试管（1ml）
4) 带试剂储器8道移液器
5) 洗涤瓶，自动或半自动洗板机
6) 能在450nm处读数的酶标仪
7) 双蒸水或去离子水
8) 吸水纸，取样吸头和计时器
6、实验前的准备说明
6.1成分准备
稀释/溶解 | 成分 | 稀释液 | 比例 | 备注 | 贮存 | 稳定性 | |
60ml | 洗涤液 | 加600ml | 双蒸水 | 1：10 | 加热至37℃以溶解结晶，充分混合 | 2-8℃
| 8周 |
6.2样品稀释
样品 | 稀释 | 稀释液 | 比例 | 备注 |
血清/血浆 | 全部稀释 | 稀释缓冲液 | 1：101 | 例：5µL+500µL |
7、实验步骤：
1) 加100µL标准品、质控品或已稀释样本于相应反应孔中，在定性检测中只使用标准品B。
2) 封板后室温（18℃-25℃）温育60分钟。
3) 移去粘性金属板，弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。
4) 在每一微孔中加入100µL酶联物。
5) 封板后室温（18℃-25℃）温育30分钟。
6) 移去粘性金属板，弃去孔中液体。用300µL洗涤液洗板3次，在吸水纸上拍干。加底物液和终止液时，如果有条件的话，可使用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气泡产生。
7) 每孔加TMB底物液100µL。
8) 室温（18℃-25℃）避光温育20分钟。
9) 在每一微孔中加入100µLTMB终止液以终止底物反应。轻轻摇动包被板以使试剂混合均匀。此时，颜色蓝色变成黄色。
10) 加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。
8、结果计算
在半对数坐标纸上或用自动生成的方法，以标准品的OD值为Y轴，浓度为X轴，绘制一标准曲线图。用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良好的实验结果。对于标准曲线图，用标准品的每一单值进行计算（样品结果明显异常的值必须删除掉，应使用更加合理的单值）。样品的浓度可直接从标准曲线上获得。一旦样品稀释了，就应当乘以相应的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于最高标准，则应根据实验前的准备说明所述对样品进行稀释，并重新检测。
9、结果判定：
＞12 U/ml 为阳性
8 - 12 U/ml 为可疑
＜ 8 U/ml 为阴性
此检测结果并不是任何治疗结果判定的唯一因素，它应当结合临床观察和诊断结果加以判断。
本译文仅供参考，详情请以原文为准。
