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森林脑炎IgG ELISA试剂盒说明（一）

2020.7.01

【预期用途】

本试剂盒可用于定量检测人血清血浆和脑脊髓液中的抗脑炎病毒（TEBV）的IgG抗体，从而控制体液免疫状态和确定疫苗接种后的血清转化。鉴别明显的和潜在的脑炎病毒的感染，通常附带着抗脑炎病毒的IgM的检测。

【临床背景】

在欧洲，森林脑炎和莱姆病是最为常见的蜱媒传染病。莱姆病分布非常广泛，但森林脑炎只存在于一些特殊的地方（德国南部、图林根州、奥地利、瑞士、匈牙利、瑞典、捷克、斯洛伐克共和国、克罗地亚、斯洛文尼亚以及一些前苏联地区等。）。

这两种病的感染都跟它们的发育类似，包含两个或两个以上的阶段。森林脑炎的病毒血症阶段含有3~14天的孵育阶段，在此阶段的初期（1-8天）会出现类似流行性感冒的症状。在大概一周没发热的间隔后，感染进入第二阶段，以神经系统方面的症状强度的改变为特征，这种阶段可能持续几周时间。

在疾病第二阶段的初期，通常可以检测到抗森林脑炎的IgM抗体。抗体水平在2~6周后达到峰值。抗体水平要降低到可检测以下可能需要10个月时间。抗森林脑炎的IgG抗体在IgM抗体出现的同时或者之后几天内即可检测到。感染意味着出现通常能维持一生的免疫力。接种疫苗也能预防疾病。

脑脊髓液中的森林脑炎特异性抗体可能是在对森林脑炎抗原进行免疫应答时或者之前由血脑屏障的功能紊乱引起的，又或者是局部的免疫应答引起的。所以，脑脊髓液中抗体水平的波动可能跟这些一般在血清或血浆中的抗体水平不一样。

由于添加了RF/IgG吸附剂所以RF因子和特异性IgG不会干涉IgM的检测。这两种检测系统的结合可以用于森林脑炎疫苗接种后的体液免疫随访或者感染，早期的森林脑炎感染和监测人血清、血浆和脑脊髓液中的抗体水平。

【检测原理】

本试剂盒使用的是两步法ELISA。微孔中包被了失活的森林脑炎病毒。稀释后的血清、血浆或者脑脊髓液样本在微孔中孵育。孵育期间，森林脑炎特异性抗体会跟森林脑炎病毒相集合，未结合的部分通过洗板洗去。加入酶联物进行孵育，HRP标记的抗人IgG抗体会跟人IgG抗体特异性结合。加入底物液后颜色转变成蓝色，孵育一段时间后加入终止液终止反应，颜色从蓝色转换成黄色，最后在酶标仪上读数。

【储存和稳定性】

此试剂盒在室温发货，储存在2 – 8℃。避免高温或太阳光直射。样本和准备好的试剂的储存和稳定性在相应的章节都有阐明。包被板条在有效期内都能保持稳定，储存在2 – 8℃下时应和干燥剂一起密封在小袋中。

【样本采集和储存】

血清、血浆或者脑脊髓液

遵守静脉穿刺的一般规定，从收集到实验期间，保存样本化学性质的完整是非常重要的，注意不要使用溶血的、脂血、黄疸的样本，样本出现浑浊应该在实验前离心并去除所有的微粒物质。
储存	2~8℃	≤-20℃（小瓶分装）	避免高温和阳光直射，避免反复冻融
稳定性	5d	12个月

【试剂组成】

数量	标识	组分
1×12×8	MTP	包被板即用，可拆分，包被了已灭活的TBE病毒
2×75mL	DILBUF	稀释缓冲液即用，红色
1×0.6mL	ENZCONJ CONC	酶联物蓝色，酶标记的抗人IgG抗体
5×0.35mL	CAL 1-5	浓缩校准品含人血清，稳定剂，防腐剂浓缩的倍数以不同的批号而不同，具体请参照瓶上的标签
2×0.35mL	Control LL Control HL	质控LL+HL 浓缩阳性质控血清，LL“低水平”HL“高水平” 含：人血清，稳定剂，防腐剂。浓缩的倍数以不同的批号而不同，具体请参照瓶上的标签
1×100mL	WASHBUF CONC	洗涤液，10倍浓缩含磷酸盐缓冲液
2×12mL	TMB SUBS	TMB底物液即用，含TMB
1×12mL	TMB STOP	TMB终止液即用，含0.5M 硫酸
2×	FOIL	封板片

注：洗涤液，底物液，终止液可以跟以下产品中的交换使用：白喉（RE57431）森林脑炎IgM（RE57411）破伤风（RE57441）

【试验需要但试剂盒不提供的设备】

1. 一次性使用的5;25;50;100;500μl加样枪头

2. 漩涡混匀器

3. 样品稀释管

4. 轨道振荡器（200-900rpm）

5. 8道微量移液器和加样槽。

6. 洗瓶，自动化或半自动化的洗板机

7. 450nm的酶标仪

8. 双蒸水或去离子水

9. 纸巾，移液管，计时器

【实验前准备】

1. 浓缩试剂的准备（用于32孔的例子）

稀释/溶解

组分

加入稀释液的量

稀释液

比例

附注

储存

稳定性

80μL

ENZCONJ CONC

8mL

DILBUF

1:101

仔细混匀

18-25℃

1小时

10mL

WASHBUF

CONC

90mL

蒸馏水

1:10

仔细混匀

2-8℃

2个月

2. 标准品、质控品和样本的稀释

	稀释方法	稀释液	稀释比例	备注
CAL 1-5 Control LL Control HL	常规稀释	DILBUF	1：101	例子：10μL 校准品/质控品+1000μL
血清、血浆	常规稀释	DILBUF	1:101	例子：10μL样本+1000μL
脑脊髓液	常规稀释	DILBUF	1:9	例子：50μL样本+400μL

用于标准曲线方法需要1~5校准品和指控血清；样本所含的浓度如果高于最高校准品浓度需要进一步稀释。用于一点标定法则只需要校准品4和质控血清即可。

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森林脑炎IgG ELISA试剂盒说明（一）

周锦帆