DNA的测序技术-3
(二)：测序胶的制备
１：玻璃板的处理
Ａ，长板（不带凹槽、反硅化处理，粘胶板）
a,２N NaOH浸泡１小时以上，自来水冲洗，海绵或软布蘸洗涤剂将板清洗干净，自来水冲洗掉全部洗涤剂，无离子水中过三遍，晾干。b,
在1ml95%乙醇，0.5%冰乙酸中加入5μl粘合硅烷。c,
用b中所配溶液浸透薄棉纸，用此薄棉纸均匀擦拭玻璃板d，晾干后，用95%乙醇单向擦拭该板，然后略微用力沿垂直方向擦拭该板。重复３此这一乙醇擦拭过程。
Ｂ：短板（带凹槽、硅化处理，不粘胶板）
a,海绵或软布蘸洗涤剂将板清洗干净，自来水冲洗掉全部洗涤剂，无离子水中过三遍，晾干。b，用硅化液浸透的薄棉纸均匀擦拭该板。c，晾干后，用薄棉纸擦掉多余的硅化液。
２，按图将两块玻璃板及夹条安装好。
３，制胶 ６％的变性胶
Acr/Bis 19:1 ,
尿素 8M
Tris 90mM
硼酸 90mM
EDTA 2mM
TEMED(%) 0.05
抽气 ４℃保存
临用前按400μl/75ml预混液的比例加入过硫酸氨(100mg/ml)
４：灌胶
（三）：电泳
１，胶凝后，插入鲨鱼齿,
２，将Ⅰ中制备好的样品在90℃加热２分钟
３，加样，电泳，维持2000伏以上恒压（在加样前，同样电压预电泳），直至指示剂跑到胶下沿。
电极缓冲液为1×TBE。
（四）：银染
１，电泳结束后，橇开板，将附着胶的一块板置于固定/终止液中浸泡过夜或震荡3０分钟，直至指示染料消失。
２，凝胶洗涤，用超纯水震荡洗涤胶３次，每次２分钟，凝胶板从水中取出后，竖起控水１０－２０秒。
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