在分子荧光分析过程中应注意哪些问题
1、辐射与物质的非吸收作用引起的误差；
2、荧光与光化学反应的影响，一般说来，荧光对分光光度测量产生的误差可以忽略，多数情况下显色体系的荧光效率很小，而且荧光发射是各向同性，只有一小部分沿着透射光方向进入检测器，使测量吸光度偏低，产生负偏离。荧光对吸收测量的影响极大程度上决定于仪器的吸收池和检测器光学设计；
3、反射和散射，吸收定律只适用于均匀介质的吸收体系，浑浊溶液因散射使实测吸光度增加，导致偏离比耳定律；
4、仪器的非理想性引起的误差；
5、复色光对比耳定律的偏离，大多数光度计只能获得接近于单色光的狭窄的光通带，实际上仍是有复色光性质，可导致偏离比耳定律。偏离的大小取决于二单色光的摩尔吸光系数差△ε，|△ε|很小时，可近似认为是单色光，在低浓度时，工作曲线仍为直线，但浓度较大时，随浓度增大，a-c曲线弯曲愈严重，故比耳定律只适用于稀溶液；
6、杂散光，杂散光是指进入检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的不需要的其它波长组分。其主要来源于分光光度计色散元件棱镜或光栅、反射镜、透镜表面的散射，单色器内壁灰尘及其它元件伤痕的反射和漫射等，杂散光可引起严重的测量误差。在仪器能量处于最小的波长处，杂散光通常处于最大值（如氘灯220nm，钨灯340nm）；
7、狭缝宽度，狭缝宽度不仅影响光谱的纯度，也影响吸光度值。在定量分析时，为了得到足够的测量信号，应采用较大的狭缝，在定性分析时则采用较小的狭缝，当出射狭缝和入射狭缝的宽度相等时，狭缝宽度引起的误差最小；
8、波长标度尺的误差，波长标度尺即仪器的波长准确度，如误差较大或未作校正，将光谱测量产生误差，即影响吸光度测量的准确度（在吸收光谱的尖峰处更为显著）；
9、不平行入射光的影响，比耳定律的前提条件之一是采用平行入射光束，以保证全部光束通过同一厚度的吸收介质，当入射光束偏离平行性较大时，就明显导致偏离比耳定律。如果仪器中光束中等强度偏离平行性，引起的吸光度测量误差一般在0.5%以内；
10、光度标尺的误差，光度标尺即透射比准确度，其误差大小直接影响光度测量的准确度。
