国际ZLRFect小核酸siRNA转染试剂/miRNA转染试剂使用说明
介绍
RFect小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。RFect可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很大的细胞毒性，并且转染效果不好。RFect采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。与其它品牌的小核酸转染试剂相比，RFect的细胞转染阳性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一般不超过70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过75%。RFect细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。有关RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际ZL，并通过PCT覆盖国际上多个国家和地区。
操作步骤：本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在30-50% 。
B. siRNA-RFect混合物准备：
6pmol siRNA 用50μl无血清培养基稀释。
2μl RFect用50μl无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min。注意：确保在25 min内执行第三步操作，不要过于延迟。
孵育5min后，将siRNA 稀释液与RFect 稀释液混合（总体积100μl）。轻轻混匀，室温孵育20 min。
C. 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：
将100μl混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5ml培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。
37°C培养18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、
所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。
转染实验要点：
转染过程不可添加抗生素，否则会导致细胞死亡；
首次实验siRNA的用量可稍大（一般10 nM） ，后续实验根据实验结果修改。
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RFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels |
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Culture vessel |
Surface area/well (cm2) |
Vol. of growth medium (µl) |
Vol. of dilution medium (µl) |
siRNA Amount (pmol) |
RFect (µl) |
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96-well |
0.3 |
100 |
2 x 10 |
1.2 |
0.4 |
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48-well |
0.8 |
250 |
2 x 25 |
3 |
1 |
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24-well |
2 |
500 |
2 x 50 |
6 |
2 |
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12-well |
4 |
1000 |
2 x 100 |
12 |
4 |
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6-well |
10 |
2500 |
2 x 250 |
30 |
10 |
转染实验优化: 为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24孔培养板，调整 siRNA与RFect试剂的用量。siRNA 用量在0.6-30 pmol(final concentration 1- 50 nM)之间调整，RFect试剂用量在1.0 - 3.0μl之间调整。客户可按照习惯用量进行预实验，如实验结果不理想，可适当调整并摸索转染试剂用量。
储存和运输
蓝冰运输，4°C 保存，长期不用于-20°C 储存，避免反复冻融
有效期
-20℃保存条件下，有效期为1年
质量控制
本产品经严格的质量检验证明，无生物污染
注意：本产品仅用于科研实验
