动物组织基因组DNA提取试剂盒使用说明（一）
动物组织基因组DNA提取试剂盒
一、简介
动物组织基因组DNA提取试剂盒(DePure Tissue DNA Kit)适用于动物组织、培养细胞、抗凝血液、体液、分泌液等生物样品的DNA提取。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提，也无需进行耗时的醇类沉淀，整个提取过程只需30分钟（不含消化时间）。动物组织基因组DNA提取试剂盒一次可处理1~20mg组织样品、1~200µl抗凝血液或体液样品、5×106个培养细胞，得到的DNA可直接用于PCR、Southern blot、LAMP、Real-Time PCR等下游实验。
二、原理
动物组织基因组DNA提取试剂盒基于硅胶柱纯化方式。样品在裂解液(Buffer MTL)和蛋白酶作用下裂解消化，DNA释放到裂解液中。加入Buffer AL和乙醇后，转移至柱子中过滤，DNA被吸附上柱子的膜上，而蛋白质则不被吸附而随溶液滤出去除。柱子经Buffer GW1洗涤蛋白质和其它杂质，经Buffer GW2洗涤去除盐分，最后DNA被低盐缓冲液(Buffer AE)洗脱，洗脱的DNA可直接用于PCR、Southern blot、LAMP、Real-Time PCR等下游实验。
DePure硅胶柱是采用高结合力的玻璃纤维滤膜为基质。滤膜在高浓度离子化剂(如盐酸胍或异硫氰酸胍)条件下，可通过氢键和静电等物理作用吸附核酸，而蛋白质或其它杂质不被吸附而去除。吸附了核酸的滤膜经洗涤去除蛋白质和盐，最后可以用低盐缓冲液(Buffer AE)洗脱出滤膜上吸附的核酸。得到的核酸纯度高，可直接用于各种下游实验。
三、组成
DePure Tissue DNA Kit
071021M | |
成份 | 含量 |
提取次数 | 48次 |
DePure gDNA Mini Columns | 48个 |
2ml Collection Tubes | 48个 |
Buffer MTL | 40 ml |
Buffer AL | 20 ml |
Buffer GW1 | 14 ml |
Buffer GW2 | 20 ml |
Proteinase K | 24 mg |
Protease Dissolve Buffer | 2ml |
RNase Solution | 300 µl |
Buffer AE | 25ml |
说明书 | 1份 |
四、保质期
动物组织基因组DNA提取试剂盒除Proteinase K外，可在室温下(15-25℃)干燥保存12个月。长期保存时需置于2-8℃。低温下，Buffer MTL可能会有沉淀形成，需37℃水浴让沉淀完全溶解。Proteinase K干粉和RNase Solution室温运输，收到试剂盒后请保存于2~8℃或-20℃。
五、需要准备材料和工具
无水乙醇(96%-100%)
灭菌的离心管和吸头
小型离心机(13,000rpm)
水浴锅或金属浴
按瓶子标签所示，加入适量的Protease Dissolve Buffer至Proteinase K干粉中至终浓度为20mg/ml，颠倒混匀让蛋白酶K充分溶解，于-20℃保存。
071041M, 48次 | 加入1.2ml Protease Dissolve Buffer至Proteinase K管子中，颠倒混匀使蛋白酶K充分溶解，保存于-20℃。 |
Buffer GW1使用前，须按瓶子标签所示，加入无水乙醇进行稀释。
071041M, 48次 | 加入28 ml 无水乙醇 |
Buffer GW2使用前，须按瓶子标签所示，加入无水乙醇进行稀释。
071041M, 48次 | 加入80ml 无水乙醇 |
