关于糜蛋白酶的效价测定介绍
1、底物溶液的制备
取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯23.7mg，置100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38. 9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.1ml，混合，pH值为7.0）50ml，温热使溶解，冷却后再稀释至刻度，摇匀。冰冻保存，但不得反复冻融。
2、供试品溶液的制备
精密称取本品适量，加0.0012mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含12～16糜蛋白酶单位的溶液。
3、测定法
取0.0012mol/L盐酸溶液0.2ml与底物溶液3.0ml，照紫外－可见分光光度法（2010年版药典二部附录Ⅳ A），在25℃±0.5℃，于237nm的波长处测定并调节吸光度为0.200。再取供试品溶液0.2ml与底物溶液3.0ml，立即计时并摇匀，每隔30秒钟读取吸光度，共5分钟（重复一次），吸光度的变化率应恒定，恒定时间不得少于3分钟。若变化率不能保持恒定，可用较低浓度另行测定。每30秒钟的吸光度变化率应控制在0.008～0.012，以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3分钟内成直线部分的吸光度，按下式计算。
式中P为每1mg糜蛋白酶的效价，单位；A2为直线上开始的吸光度；A1为直线上终止的吸光度；T为A2至A1读数的时间，分钟；W为测定液中含供试品的量，mg；0.0075为在上述条件下，吸光度每分钟改变0.0075，即相当于1个糜蛋白酶单位。
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