1.将凝胶放在含 250 ml 固定液的平皿中，在摇床上摇动 5 min。如果有多块凝胶要固定，应在单独的平皿中染色。
2.从平皿中排尽固定液，用方形塑料纸或聚碳酸酯薄片支持凝胶。不允许戴手套的手直接和凝胶接触。再加 250 ml 固定液，继续摇 15 min。 3.弃去固定液，在平皿中再次加人 250 ml 敏化液，在往复式或定轨式摇床上摇动 30 min。 4.从培养皿中排尽固定液，在平皿中用方形塑料纸或聚碳酸酯薄片支持凝胶，加足够董的去离子水来覆盖凝胶。在摇床上摇动凝胶 5 mm。 5.排尽水，重复水洗 2 次以上。 6.在步骤⑦之前 30?60 min 制备银染溶液。 对 4 个标准大小的凝胶，IL 银染溶液是足够的。 7.排尽平皿里的水，支持凝胶在平皿中用方形塑料纸或聚碳酸醋薄片。在每个平皿中加 250 ml 银氨溶液在往复式或定轨式摇床上摇 20 min，摇动时间可缩短至 15 min。如有必要，应至少 15 min，不超过 20 min。 8.将银氨染色溶液倒人一个合适的废物缸中，确保不用戴手套的手接触凝胶。 9.加足够的水来覆盖凝胶。在摇床上摇 5 min。 10.排尽水，将第一次洗液倒入盛有硝酸银的废物缸。重复用 H2O 洗 2 次以上。 11.当洗凝胶时，制备显色液和终止液。将终止液放在易操作的位置以避免显色和终止之间的延迟。 12.从平皿中排尽水，在平皿中用方形塑料纸或聚碳酸酯薄片支持凝胶。在培养皿中加 250 ml 反应液。在放有白纸的摇床上摇动。 白纸可提高被染色蛋白和背景之间的反差，提高决定反应终止点的准确度。 实验提示：一次不要同时显色 3 块以上的凝胶。准备显色凝胶之前在 H2O 中保存其他凝胶。合适的显色时间随每块胶的不同而不同。单独观察凝胶决定显色终止的合适时间。当蛋白质点出现黑色或小的蛋白质点变明显时，这一时间是较合适的。第一个蛋白质点出现约需 lmin。注意不要过度显色。合适的时间通常约为 5~lOmin。
13.当凝胶充分显色后，将显『色液倒人合适的废物缸内。在平皿中用方形塑料纸或聚碳酸酯薄片支持凝胶，快速将 250 ml 终止溶液倒人平皿中，在摇床上摇动 IOmin0 14.弃去终止液，用 H2O 覆盖凝胶，在摇床上摇动 5 min。 15.倒掉水，重复水洗 2 次以上，准备对凝胶进行扫描分析或质谱分析。 实验提示：Gharahdaghi 等（1999) 曾报道，在凝胶消化前，脱色以除去银颗粒可能会提高质谱的效果。
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