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克隆PCR产物的最优条件

2020.2.26

最佳插入片段:

载体比需实验确定,4:1(插入片段:载体)常为最佳比,摩尔数比1:8 或8:1也行。应测定比值范围。

连接用5μL2X连接液,50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶,插入片段共10μL。

室温保温1h,或4℃过夜。

在这2种温度下,缺T-凸出端的载体会自连,产生蓝斑。

室温保温1h能满足大多数克隆要求,为提高连接效率,需4℃过夜。


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