克隆PCR产物的最优条件
最佳插入片段:
载体比需实验确定,4:1(插入片段:载体)常为最佳比,摩尔数比1:8 或8:1也行。应测定比值范围。
连接用5μL2X连接液,50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶,插入片段共10μL。
室温保温1h,或4℃过夜。
在这2种温度下,缺T-凸出端的载体会自连,产生蓝斑。
室温保温1h能满足大多数克隆要求,为提高连接效率,需4℃过夜。
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