细菌抗酸染色可以应用于（1）不易于其他染色料的细菌进行染色（2）细菌的形态分析。
| 实验方法原理 | 结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，经此染色后，结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。 |
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| 实验材料 | 结核病人痰 |
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| 试剂、试剂盒 | 抗酸染色液盐酸酒精吕氏美蓝染液 |
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| 仪器、耗材 | 显微镜玻片接种环 |
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| 实验步骤 | 1、取洁净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰，在清洁无油脂玻片上涂开。涂抹区约拇指盖大。用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌。
2、涂片自然干燥后，用片夹挟住玻片一端，通过火焰固定。
3、涂抹面用滤纸片盖上，然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液，使滤纸片完全被染液浸湿，持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰，此时可见到玻片上冒出蒸气。待蒸气消失后再加温，如此反复3～4次，约5min，加温时随时添加染液勿使纸片干涸。
4、玻片冷却后，用接种环挑去滤纸扔到污物盆内，流水冲洗玻片。
5、滴加3%盐酸酒精脱色，至涂抹均匀部位基本没有红色再脱下为止，水洗。
6、滴加吕氏美蓝染液30sec，水洗。
7、吸干、镜检。
4、溶液配制
萋－尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸复红液：硷性复红4g，溶于95%酒精100ml，作成饱和溶液，再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。
(2)3%盐酸酒精液。
浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液
美蓝2g，溶于95%酒精100ml中，作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。 展开 |
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| 注意事项 | 1. 生物样品在使用时禁止直接接触，避免感染。
2. 使用完需要灭菌处理并且放置到指定位置统一处理。 |
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| 其他 | 抗酸染色法acid－fast staining method 1882年由埃利希（F．Ehrlich）首创并经F．齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森（Ziehl－Neelsen）染色法和齐尔-加贝特（Ziehl－Gabbet）染色法。用石炭酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。
溶液配制
萋－尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸复红液：硷性复红4g，溶于95%酒精100ml，作成饱和溶液，再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。
(2)3%盐酸酒精液。
浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液
美蓝2g，溶于95%酒精100ml中，作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。 展开 |
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