细胞生长曲线实验
实验方法原理 |
细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,是判定细胞活力的重要指标。一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮然后贴壁,随后度过长短不同的潜伏期,即进入大量分裂的指数生长期。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化,典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期,斜率较大的指数生长期,呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。 |
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实验材料 | 细胞 |
试剂、试剂盒 | D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 双抗 0.08%胰酶 |
仪器、耗材 | 净化工作台 离心机 恒温水浴箱 冰箱 倒置相差显微镜 培养箱 吸管 培养瓶 吸头 枪头 24培养板 胶塞 微量加样枪 红血球计数板 |
实验步骤 |
1. 取生长状态良好的细胞,采用一般传代方法进行消化,制成细胞悬液。
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注意事项 |
1. 细胞生长曲线虽然最为常用,但有时其反映数值不够精确,可有20~30%的误差,需结合其它指标进行分析。 2. 现在很多实验室利用培养板采用MTT法进行生长曲线测定,较为简便。
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其他 |
1. 标准的细胞生长曲线近似“S”形,一般在传代后第一天细胞数有所减少,再经过几天的潜伏适应期,然后进入对数生长期,达到平台期后生长稳定,最后到达衰老。 2. 在生长曲线上细胞数量增加1倍时间称为细胞倍增时间,可以从曲线上换算出。
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