流式细胞术应用 | 囊泡检测步骤详解
实验简介
囊泡天然存在于体液中，并稳定携带了一些重要的信号分子。囊泡相关功能的研究已经成为研究热点，并有望在多种疾病的早期诊断中发挥作用。通常因流式细胞仪无法检测低于 250nm 的颗粒，因而并不是检测囊泡微颗粒的最佳选择。
而贝克曼库尔特公司 CytoFLEX 流式细胞仪的问世，为流式检测囊泡微颗粒开辟了蹊径。 CytoFLEX 是第一台可检测 100 nm 微颗粒的流式细胞仪，并具有可同时检测 13 色荧光、单个样本存储量大等 优秀性能，为微颗粒的检测提供了理想的检测平台。
材料与方法
▶ 试剂
▶ 样品制备
| Sample Type | 全血 |
| Species | 小鼠 |
| Age of specimen | 新鲜 |
| Prep Method | 1. 取新鲜的小鼠全血，加入柠檬酸钠抗凝剂。用离心机 2500 xg 离心 15 min，将上清液倒掉； 2. 画 FSC/VSSC 散点图，用 Megamix-Plus FSC beads（100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm）来标定囊泡微颗粒的位置； 3. 用 Annexin V FITC, CD41 PE and CD63 PE-Cy7 对囊泡微颗粒进行染色，用 CytoFLEX 进行检测。 |
▶ 数据分析
1. 建立 FSC / VSSC 散点图，检测 Megamix-Plus FSC beads（100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm），调整 gain 值。圈定 100 nm～900 nm 微颗粒分布区域，设定门 MP Gate。同样电压条件下，样本检测管分布于 MP Gate 门内的即为囊泡微颗粒；
2. 建立 AnnexinV-FITC/APC 双参数散点图，通过 AnnexinV 表达量的多少，区分不同类型的微颗粒。并建立 CD63-PE/CD41-PC7 双参数的散点图，来检测不同类型的囊泡微颗粒，细胞表面抗原的不同。
* 实验数据由 Kaluza 软件分析
实验结果
1. Megamix-Plus FSC beads 检测结果
根据微球（100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm）的分布，界定微颗粒的位置，将门命名为「MP Gate」。
