BIOG细菌RNA提取试剂盒使用说明
特点
◎提取RNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为1.8-2.0；
◎产率高，同样的样本量提取的RNA更多。
◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂，安全无毒。
◎对于革兰氏阴性菌和一般的革兰氏阳性菌有较好的提取效果。
试剂盒组成
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组分 |
50次 |
100次 |
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吸附柱和收集管 |
各50个 |
各100个 |
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裂解液I |
12 mL |
24mL |
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裂解液Ⅱ |
12 mL |
24mL |
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析出液 |
4.5 mL |
9 mL |
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洗涤液 |
9 mL |
18 mL |
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洗脱液 |
12mL |
24 mL |
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消化液 |
1.2 mL |
2.4 mL |
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说明书 |
1份 |
1份 |
产品介绍
BIOG RNA Bacteria Kit适用于革兰氏阴性菌和一般的革兰氏阳性菌。对于细菌壁较厚的革兰氏阳性菌、真菌、细菌芽孢等须首先破壁处理。BIOG RNA Bacteria Kit采用复合消化液消化菌体中的蛋白质，使细胞RNA更容易释放出来，因而本试剂盒RNA提取产率较高。BIOG RNA Bacteria Kit采用了最新的离子膜技术并反复优化了裂解液和洗脱液配方，提取得到的RNA纯度更高，最大限度地去除了蛋白、脂类等杂质污染，可以直接应用于Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。
操作步骤：
1.请自行准备：无水乙醇、生理盐水及无RNA酶的1.5mL离心管。
2.取出析出液和洗涤液，按以下操作：
a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇；9mL加入51mL无水乙醇。
b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。
c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3.细菌处理：将收集的细菌5,000 rpm离心3分钟，弃上清，加入200μL生理盐水，振荡混匀，5,000 rpm离心3分钟，弃上清。
4.a) 对于革兰氏阴性菌和一般的革兰氏阳性菌，加入200μL裂解液Ⅰ，悬浮沉淀，37℃放置30分钟。
b) 对于细菌壁较厚的革兰氏阳性菌、真菌、细菌芽孢等须首先自行进行破壁处理，处理结束后进行步骤5操作。
5.加入200 μL 裂解液Ⅱ，20μL消化液，充分振荡混匀， 56℃水浴10 分钟。
6.加入600μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。
7.将吸附柱放入收集管内，取上述溶液600μL转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
8.将剩余400μL液体转入上述吸附柱内，重复操作步骤7。
9.将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
10.将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
11.取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入50-200 μL 洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2分钟，收集RNA溶液。提取的RNA -70℃保存，或直接用于下一步实验。
注意事项：
析出液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。
细菌量建议不高于107。
裂解液Ⅱ如有白色絮状物析出属正常现象，置于37℃水浴中溶解即可。
储存、运输和有效期
本试剂盒可常温运输，室温（15-25℃）保存，有效期为12个月，消化液请于-20℃存放，避免反复冻融，裂解液Ⅰ请于4℃保存。
质量控制
本产品经严格的质量检验证明，无生物污染
