外泌体lncRNA介导的淋巴转移机制的揭秘（一）
文章导读
外泌体是指包含多种RNA（环状RNA、miRNA、LncRNA和mRNA等）和蛋白质的盘状囊泡（30-200nm）。几乎所有类型的细胞均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于各种体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等。外泌体被视为特异性分泌的膜泡，能够参与细胞间通讯。目前，有关外泌体分泌、摄取、内容物以及相应功能的精确分子机制的研究才刚刚起步，对外泌体的研究兴趣也是日益增长。
2020年2月6日，外泌体领域大牛Raghu
Kalluri教授在Science杂志（影响因子41.037）发表了关于外泌体的综述，该综述介绍了外泌体的生物发生、异质性、以及细胞间通信过程，同时也分析总结了外泌体在哺乳动物的繁殖和发育、神经退行性疾病、代谢和心血管疾病、免疫反应和感染、癌症以及在临床诊断和治疗应用等领域中的重要价值，激发了该领域的研究热度。2020年1月2日，The
Journal of Clinical Investigation杂志（影响因子12.282）刊登了一篇外泌体lncRNA
LNMAT2促进膀胱癌淋巴转移过程的文章。该篇文章巧妙利用多种技术揭示了外泌体lncRNA介导的淋巴转移机制，并将LNMAT2作为膀胱癌淋巴转移的治疗靶点。
发表期刊：The Journal of Clinical Investigation
影响因子：12.282
实验方法：LncRNA-seq、RNA pull-down+MS/WB、RIP、ChIP、双荧光素酶报告实验（云序可提供以上服务）
实验样本：淋巴转移膀胱癌组织vs.非淋巴转移膀胱癌组织（5 vs. 5 ）
文献链接：
https://www.jci.org/articles/view/130892/pdf
文章内容
（1）LNMAT2过表达与BCa淋巴结转移相关
作者前期通过对5对淋巴转移膀胱癌组织（LN+）和非淋巴转移膀胱癌组织（LN-）进行LncRNA-seq（云序可提供此服务）发现，LNMAT2在淋巴转移膀胱癌（Bca）组织明显上调；对266名膀胱癌组织进行qPCR，结果显示LNMAT2在LN+中明显上调；K-M分析显示，LNMAT2过表达的膀胱癌病人生存率（OS）和无病生存率（DFS）明显少于低表达LNMAT2组。这些数据说明LNMAT2过表达可能引起BCa的LN转移。
图注：LNMAT2过表达与BCa淋巴结转移相关
（2）LNMAT2在BCa细胞分泌的外泌体中富集
作者利用ISH实验发现，在BCa的胞外间隙中有较高的LNMAT2表达（D）；与LN（-）-BCa组织相比，LN（+）-BCa组织中细胞外LNMAT2的表达明显升高。细胞外lncRNA主要被包裹在特定的亚细胞物质中（特别是外泌体），提示LNMAT2可能被BCa细胞外泌体包裹。为了验证这一假设，作者从206例BCa患者和120例健康对照组的尿液样本中分离出外泌体并进行qPCR实验，发现与健康对照组相比，来自BCa患者的尿液外泌体中LNMAT2表达上调。这提示外泌体LNMAT2对BCa的发生发展有重要意义。
图注：LNMAT2在BCa细胞分泌的外泌体中富集
（3）BCa细胞分泌的外泌体LNMAT2在体外促进淋巴生成
作者首先对BCa细胞系（5637和UM-UC-3）进行外泌体鉴定；下调/过表达LNMAT2的BCa细胞系外泌体与人淋巴内皮细胞（HLEC）共孵育，血管形成实验和迁移实验发现下调LNMAT2能够抑制HLEC的血管形成和迁移，上调LNMAT2则相反；体内实验证明，上调LNMAT2能促进淋巴生成。
图注：BCa细胞分泌的外泌体LNMAT2在体外促进淋巴生成
（4）hnRNPA2B1介导LNMAT2包装进入BCa细胞外泌体
为了探究LNMAT2的分子机制，作者进行LNMAT2 RNA pull-down+MS（云序可提供此服务）实验，结果显示hnRNPA2B1能够与LNMAT2直接结合；为了验证MS结果，作者进行LNMAT2 RNA pull-down+WB、RIP+qPCR（云序可提供此服务）实验，结果显示LNMAT2确实能够与hnRNPA2B1直接结合；而且FISH实验显示LNMAT2和hnRNPA2B1能够定位于细胞核；为了探究LNMAT2是如何进入BCa细胞外泌体的，作者在BCa细胞系中敲减hnRNPA2B，发现外泌体中LNMAT2的表达降低。这些结果说明hnRNPA2B1能够介导LNMAT2包装进入BCa细胞外泌体。
图注：hnRNPA2B1介导LNMAT2包装进入BCa细胞外泌体
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技术原理
