外泌体lncRNA介导的淋巴转移机制的揭秘（二）
（5）外泌体LNMAT2上调PROX1的表达
有研究报道，PROX1通过调节内皮细胞的分化和转移，对淋巴管系统发育至关重要。因此作者通过qPCR和WB实验发现，HLECs中上调LNMAT2能够促进PROX1的表达；为了探究LNMAT2调控PROX1表达的分子机制，作者进行核质分离PCR，发现LNMAT2主要存在于HLECs的细胞核中；为了探究LNMAT2是否参与启动子区结合，作者针对PROX1上游-2000
bp到下游+200bp分区间进行双荧光素酶报告实验（云序可提供此服务），结果显示PROX1在-650bp到-350bp区间的荧光值明显升高，说明该区域能够与LNMAT2结合。
图注：外泌体LNMAT2上调PROX1的表达
（6）外泌体LNMAT2与hnRNPA2B1互作促进PROX1启动子区H3K4三甲基化
研究发现，hnRNPA2B1能够通过与目标DNA结合参与H3K4三甲基化（H3K4me3）相关的表观遗传调控。为了探究hnRNPA2B1是否也具有类似功能，作者通过ChIP实验（云序可提供此服务）验证，在LNMAT2过表达的HLECs中，hnRNPA2B1与H3K4me3都与PROX1启动区结合能力增强，反之亦然；这说明外泌体LNMAT2通过与hnRNPA2B1直接互作提高PROX1启动子中H3K4me3的水平。
图注：外泌体LNMAT2与hnRNPA2B1互作促进PROX1启动子区H3K4三甲基化
（7）外泌体LNMAT2诱导PROX1上调促进淋巴淋巴转移
为了明确PROX1是否为BCa外泌体LNMAT2诱导淋巴管生成所必需的，作者进行了PROX1挽救实验，发现PROX1过表达能够回补外泌体LNMAT2过表达导致的抑制HLEC血管形成和迁移现象；相反，PROX1沉默明显消除了外泌体LNMAT2诱导的HLEC血管形成和迁移现象。
图注：外泌体LNMAT2诱导PROX1上调促进淋巴转移
（8）外泌体LNMAT2与BCa患者的淋巴结转移有关
研究证明，BCa细胞分泌的外泌体lncRNA可以在尿液中检测到，并且这些尿液外泌体lncRNA被认为可以作为早期诊断BCa的生物标志物，作者对另外206例BCa患者尿液外泌体进行qPCR，结果显示LNMAT2在LN（+）BCa中明显上调；KM分析显示尿液外泌体LNMAT2高表达BCa患者的OS
和DFS是降低的；ROC曲线分析显示尿外泌体LNMAT2可以作为BCa和LN（+）BCa诊断的生物分子标志物。
图注：外泌体LNMAT2与BCa患者的淋巴结转移有关
总结
总体来说，该研究通过LncRNA-seq（云序可提供此服务）筛选了在淋巴转移的膀胱癌中上调的LNMAT2，并通过原位杂交实验将LNMAT2与膀胱癌外泌体联系在一起，并巧妙利用了RNA pull-down+MS/WB、RIP、ChIP以及双荧光素酶报告实验等方法（云序可提供以上服务），探究hnRNPA2B1介导LNMAT2进入膀胱癌外泌体中，外泌体LNMAT2被人淋巴管内皮细胞摄取内化后，通过募集hnRNPA2B1和增加PROX1启动子上的H3K4三甲基化水平，进一步上调PROX1表达，最终导致淋巴管生成和淋巴转移。这为研究和理解生物体复杂的外泌体调控机制，提供了比较完整的实验研究思路和方案，具有很强的理论先导性和示范性，也为疾病的调控和靶点提供了重要的理论依据。
图注：膀胱癌外泌体LNMAT2调控淋巴转移的分子机制
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