DNA聚合酶的特性、用途和缺点
特性
良好的热稳定性;
70℃ 2h,残留90%活性;
93℃ 2h,残留60%活性;
94℃ 2h,残留40%活性。
5'→3'聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性;
5'→3'外切酶活性;
无3'→5'外切酶活性。
用途
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。
Taq酶扩增的PCR产物,3'末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基,而这个碱基几乎总是A,因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性,故可用T载体克隆。
缺点
无3'→5'阅读校正功能,在PCR扩增过程可引起错配,30次循环错配率约0.25%。
措施:选择高保真Taq酶,如Pfu。
原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。
注意:Pfu扩增产物为平末端。
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