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DNA聚合酶的特性、用途和缺点

2022.7.19

特性

良好的热稳定性;

70℃ 2h,残留90%活性;

93℃ 2h,残留60%活性;

94℃ 2h,残留40%活性。

5'→3'聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性;

5'→3'外切酶活性;

无3'→5'外切酶活性。

用途

聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。

Taq酶扩增的PCR产物,3'末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基,而这个碱基几乎总是A,因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性,故可用T载体克隆。

缺点

无3'→5'阅读校正功能,在PCR扩增过程可引起错配,30次循环错配率约0.25%。

措施:选择高保真Taq酶,如Pfu。

原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。

注意:Pfu扩增产物为平末端。


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