乙酸激酶的测定
实验方法原理
ATP:乙酸磷酸转移酯(AK)
乙酸+ATP→乙酰磷酸+ADP
这个反应可以与丙酮酸激酶(PK)偶联,乳酸脱氢酶(LDH)反应如下:
实验材料 酶样品
试剂、试剂盒 三乙醇胺-HCl KOH乙酸钠ATPMgCl2磷酸烯醇式丙酮酸LDHPK
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.98 ml 实验混合物
0.02 ml 酶样品
25 ℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
注意事项
其他
试剂:
0.1 mol/L 三乙醇胺-HCl/KOH,pH 7.6(三乙醇胺-HCl,用 1 mol/L KOH 调节 pH 7.6)
2 mol/L 乙酸钠(Mr=82.0;16.4 g 溶于 100 ml 水中)
0.1 mol/L ATP(二钠盐,三水合物,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)
0.1 mol/L MgCl2(六水合物,Mr=203.3;203 mg 溶于 10 ml 水中)
0.01 mol/L 磷酸烯醇式丙酮酸(PEP,三环己基铵盐,Mr=465.6;46 mg/10 ml)
LDH,20 mg/ml,约 500 U/mg
PK,10 mg/ml,500 U/mg
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