常见破膜剂如何选择
常见破膜剂有：① 皂素；② 有机溶剂：乙醇、甲醇、丙酮等；③ Triton-X、Tween-20。 破膜剂选择原则： ① 尽量保持细胞形态，使可根据散射光信号分析细胞种类，如区分淋巴细胞、单核细胞和粒细胞； ② 不影响细胞膜表面抗原与抗体的特异性结合（若需同时检测细胞内外抗原）。 常见破膜剂对比： ① 细胞形态影响：利用皂素破膜，外周血细胞的流式散射光图中淋巴细胞、单核细胞和粒细胞分群清晰；而另两种破膜剂，通过与细胞膜上的蛋白质和脂质作用发挥破膜效果，易导致细胞发生皱缩，这3群细胞很难分开； ② 对抗原影响：a.标记表面抗原和破膜两步操作的先后顺序有所影响：以检测表面CD8为例，先标记再破膜对CD8无明显影响，而先破膜再标记，乙醇和Triton-X会使表达CD8细胞比例和每个细胞上抗原表达量急剧下降；b.对不同抗原的影响不同：如检测IFN-γ时，Triton-X破膜会导致其检测率降低，而皂素和乙醇无影响；检测TNF-α时，皂素的敏感性要高于其他两种。 ③ 其他：皂素的破膜效果是可逆的，一旦被洗掉容易导致破膜失效，因此在后续实验过程中需用含有皂素的洗涤液洗涤；有机溶剂可实现固定和破膜；Triton-X和Tween-20相似，可破坏所有脂质层，可破核膜。总体来说，皂素是相对理想的细胞破膜剂，但无法破核膜，若需破核膜还是要用Triton-X和Tween-20。
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