荧光定量PCR数据分析举例
首先看基线与阈值设置的是否合理;在基线和阈值设置合理的基础上,得到的CT值才是准确可靠的;在CT值是准确的基础上再进行相对定量或绝对定量实验。
1 绝对定量实验数据分析注意要点:
1.1 绝对定量实验对检测体系的扩增效率不做硬性要求;
1.2 检测的样本浓度必须落在标曲线性范围之内;否则该样本检测浓度不在此标曲有效范围内,需要根据实际情况扩大标曲的范围或对样本进行稀释或浓缩使之落在标曲线性之内;
1.3 标曲与待测样本必须在同一趟实验上进行才有效,不可用不同趟实验的标曲进行绝对定量计算;
2 相对定量实验数据分析注意要点:
2.1 相对标准曲线法:注意要点同绝对定量;
2.2 2的-δδCt法: 本方法要求靶标基因和内参基因的扩增效率尽可能相等且接近100%; 参比样本和实验样本的靶标基因和内参基因在同一趟实验中进行检测;
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