高速逆流色谱法分离制备大豆异黄酮中大豆苷和染料木苷
摘 要：采用高速逆流色谱法分离纯化大豆异黄酮中的大豆苦和染料木昔。溶剂系统为乙酸乙酯一醋酸一水，体积比为5:1:10，上相为固定相，下相为流动相，逆流色谱仪转速为800r/mm，流速为1.5ml/min。所得大豆昔、染料木昔经高效液相色谱分析测定，纯度分别达到98.2%
高速逆流色谱( H S C C C ) 是20 世纪8 0 年代初，由Yoichiro Ito博士发明的一种不用固态载体的液液分配色谱新技术，能实现连续有效的分配功能[ 1 ] 。由于不使用固态载体，可避免分离样品与固态载体表面发生化学反应而导致的化学变性、有机物的吸附污染等现象，并且被
分离样品成分具有高回收率。每次分离样品结束后，管道中残留溶剂均可冲出，不会对后续分离产生任何影响。高速逆流色谱法已在天然药物化学成分、天然产物的分离等方面得到大量的应用，并在稀土元素、大分子物质等方面也有许多应用报道，包括黄酮类化合物。儿茶素、皂苷、蛋白质、氨基酸、生物碱等[ 2 ] 。
大豆异黄酮是大豆中的一种特殊生物活性成分，流行病学调查、动物实验和癌细胞培荞实验均证实大豆异黄酮具有众多的生物活性功能，包括抑制乳腺癌、前列腺癌、白血病及一些肝癌、胃癌细胞系的生长和增殖，对抗胆固醇。保护心血管、预防动脉栓塞，预防骨质疏松，提高畜禽生产机能，调节女性经期不适[ 3 ] 。大豆异黄酮的含量，因品种、生长地区的不同而有较大的差异[4～6]。品种是异黄酮含量的重要影响因素，但无论什么品种的大豆，大豆苷、染料木苷及其丙二酸化形式的糖苷均是大豆籽粒中的主要成分[7]，常规的加热即可实现丙二酰化形式异黄酮糖苷向大豆苷和染料木苷的转化[8]。异黄酮苷元及乙酸化形式的异黄酮糖苷、黄豆黄苷、丙二酰
化黄豆黄苷的含量均很低。全豆和大豆配料中，9 7 %～9 8 % 的异黄酮是以葡萄糖苷形式存在，含量范围为0 .12%～0.42%[7][9]。因此，本文以大豆中含有的主体成分——大豆苷和染料本苷为目标，研究分离制备方法。
提取纯化大豆异黄酮的方法，主要有溶剂提取法、碱提取酸沉淀法、活性炭吸附法、离于交换树脂法、柱层析法、制备型高效液相色谱法、逆流色谱法等[ 1 0 ～1 6 ]。但是前面5 种方法中，只能分离得到较高纯度的异黄酮，其中还含有多种组分；制备型高效液相色谱法虽然能分离
得到异黄酮单体，但是处理样品量太小，一般为数十毫克量级[13]；近年来有极少数关于逆流色谱法分离大豆异黄酮的报道。大豆异黄酮的制取，一般将大豆片或脱脂大豆片经水、醇等溶剂浸提，加热、分离溶出液得粗异黄酮制品，再经色谱柱或其他方法精制得高纯度异黄酮制品；也可将溶出液经超滤膜等分离，透过液冷却、结晶化，再经离心分离或过滤得异黄酮结晶物；或者用树脂吸附，再经水、醇溶剂淋洗，溶出一定浓度的异黄酮，真空干燥得到异黄酮制品。但是，目前这些方法生产的大豆异黄酮均是粗品，包含大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素，以及它们的苷元、乙酰化和丙二酰化形式等成分，总含量约为40% 或80%，此外还含有其它杂质。杜琪珍等[ 1 5 ]报道了逆流色谱法分离大豆异黄酮的方法，但所使用的六元溶剂系统(正己烷－乙酸乙酯－正丁醇－甲醇－乙酸－水，1:2:1:1:5:1，V/V/V/V/V/V)极为复杂。杨福全等[16]采用分步分离法，分别用三种溶剂系统分离大豆异黄酮的方法，也极为复杂。本实验直接针对大豆中的主要异黄酮组分，采用HSCCC，选择更为适当和简单的溶剂体系，从大豆异黄酮粗品中直接分离制备大豆昔和染料木苷( 另两种主要的丙二酰化形式的糖苷，可通过简单的加热转化为这两种成分) ，为大规模制备大豆异黄酮类单体化合物提供更为便捷的方法，也为HSCCC 分离相似的化合物提供实施例和可参考的技术。
