一、材料与设备
1. 水浴。
2. 垂直电泳装置。
3. 电转移装置 。
4. 杂交管。
5. 杂交炉。
6. 暗片盒。
7. X 射线片。
8. 尼龙膜。
9. 工具酶：RNase A、RNase T1、RNase H 和蛋白酶 K。
10. 杂交缓冲液：40 mmol/L PIPES ( pH 6.4 )，1 mmol/L EDTA，0.4 mol/L NaCl，80% 甲酰胺。
11. RNase 酶切混合物：0.3 mol/L NaCl，10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.4 )，5 mmol/L EDTA，90 U/ml RNase T1，40 μg/ml RNase A。
12. 加样终止缓冲液：20 mmol/L EDTA ( pH 8.0 )，95% 甲醜胺，0.5 mg/ml 二甲苯青 FF，0.5 mg/ml 溴酚蓝。
13. TBE 缓冲液：0.5 mol/L Tris-硼酸（pH 8.3 )，10 mmol/L EDTA。
14. [ 32P ] 标记的 RNA 探针。
二、操作方法
1. 按照引物延伸法将单链寡核苷酸 DNA 与靶 RNA 退火。
2. 制备下列混合物：退火反应物 15 μl，100 mmol/L MgCl2 2.25 μl，10 mmol/L DTT 4.5 μl，RNase H 1.5 μl（6U），加水至终体积为 45 μl。
3. 将混合物于 37℃ 1 h，加入 2 μl 0.5 mol/L EDTA 以终止反应，并于 37℃ 反应 10 min 以灭活 RNase H。
4. 加入 55 加人 55 μl TE，并用 1/20 体积 4.5 mol/L NaAc ( pH 6.0) 和 2.5 倍体积冷的 95% 乙醇于 -20 ℃ 过夜沉淀 RNA。
5. 以 12000 g 离心 15 min，4℃ 回收RNA，用70%乙醇洗涤沉淀，12000 g 离心 10 min，在旋转真空冷冻干燥器中干燥沉淀。RNase H 酶切的 RNA 片段既可用 RNA 作图中引物延伸中 5' 端标记的方法加以检测，也可用 Northern 印迹方法进行检测。
6. 用 3 μl H2O 重悬沉淀，加入 3 μl 加样终止缓冲液并迸行变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳。
7. 电泳结束，将凝胶浸入 0.5X TBE 缓冲液中 15 min。安置一个将 RNA 从凝胶转移至膜转移用的“滤纸一凝胶一尼龙膜”的“夹层”，确保在膜和凝胶之间没有产生气泡。
8. 将上述的“夹层”插入含有冷的 0.5X TBE 缓冲液的转移装置中，使膜置于凝胶和阳极之间。
9. 电印迹使 RNA 从凝胶转移至膜上。电印迹的条件将根据 RNA 分子大小和凝胶尺寸而变化。通常对于一个 14 cmX 18 cm 聚丙烯酰胺凝胶，小于 1000 nt 的 RNA，以 500 mA (U=65V) 印迹 3 h 即可发生完全的转移。
10. 在 0.5 X TBE 缓冲液中洗膜 5 min，并将膜晾干。
11. 在真空烘箱中于 80℃ 烤 2 h 或用 UV 交联机照射使 RNA 与膜发生交联，然后按照 Northern 印迹章节中所述的方法用适当的探针通过杂交检测 RNA 片段。 | 
