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真菌毒素检测——样品净化前处理

2020.2.21

近年来，真菌毒素对粮食饲料的污染是一个全球性的热点问题，不仅以黄曲霉毒素(Aflatoxin)，赭曲霉毒素A(Ochratoxin A)，单端孢菌毒素(Trichothecenes)，玉米赤霉烯酮(Zearalenone)，烟曲霉毒素(Fumonisin)和串珠镰刀菌素(Moniliformin)发生较多，而且真菌毒素种类繁多、结构复杂多样，这就造成实际生产中，真菌毒素的定量检测成为困扰我们的重要难题之一，目前的检测方法包括薄层色谱法、酶联免疫法、免疫亲和柱净化高效液相色谱法。但薄层色谱法操作繁琐、污染大、定量差、耗时长;而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高，但特异性差，假阳性高;免疫亲和柱高效液相色谱法成本太高, 对于高黄曲霉毒素含量的样品偏差较大。迫切需要一种样品处理简便易行、快速准确、灵敏度高、检测限低，检测成本低廉的检测方法和技术。

针对这些检测难点和问题，长期致力于真菌毒素检测技术研究的AOAC认证实验室之一的美国Trilogy分析实验室经过不懈努力和多次试验验证，成功研发出了PuriToxSR系列各类真菌毒素多功能净化柱和专用净化柱，将极性、非极性及离子交换等多类基团作为填充剂填充到柱体中，可选择性吸附样液中的脂类、蛋白类等杂质,从而对毒素样品起到非常针对性的纯化作用; PuriToxSR系列净化柱就是采取这种独特设计原理过柱后将干扰物杂质等截留在柱内填充物,样液中的毒素不被吸附而直接通过。其显著特点是，一步就可完成毒素样品的净化(操作步骤见下图)， 30秒左右即完成整个净化过程，净化效果理想, 实验证明，对谷物样品PuriToxSR系列净化柱比免疫亲和柱回收率还要高，其对所有真菌毒素的回收率均在85-95%; 之二是操作步骤更为简便，净化前也不需进行活化、淋洗和洗脱等操作只需直接上样，有效减少有机溶剂的使用和浪费;其操作明显不同于免疫亲和柱和固相萃取柱(SPE)，后两者净化样品至少需要三步 1)将样品中的待测物吸附到柱上;2)清洗柱上的杂质;3)用有机溶剂洗脱柱子上的待测物。

其中PuriToxSR TC160多功能净化柱实现了一步净化含多类毒素(黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和单端孢霉烯族毒素(包括呕吐毒素)三类)样品的目的，过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和单端孢霉烯族毒素(包括呕吐毒素)三大类毒素含量的检测，回收率达到90%以上,有效降低单个检测成本.

总之，PuriToxSR系列真菌毒素净化柱整个净化过程样品处理简单，操作简便易行、快速准确、灵敏度高、检测限低，检测成本低廉,适合大批量检测，并能避免氯仿等有毒试剂的使用,在国际上不少试验室已得到确认，也是得到AOAC的官方认可的检验方法。目前在国内的粮油质检系统、疾控系统和进出口检验已广泛采用这种新的检测方法，而且实践证明，这是一种值得推广和应用的真菌毒素检测新技术。

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