中药样品的前处理技术介绍
中药及其制剂的分析检验,一般多采取估计取样,即将整批中药抽出一部分具有代表性的供试品进行分析、观察,得出规律性“估计”的一种方法。对检测结果进行数据处理和分析,最后做出科学的评价。取样时应注意以下两点。
(1)取样要具有一定的代表性;取样的基本原则应该是均匀、合理。为使供试品能准确地反映整批中药及其制剂的质量,取样时必须抽取具有高度代表性的样品,以便得出正确的结论。
(2)应严格按照规定的取样方法进行取样:如取样的部位不当,操作方法不合理,则会影响到取样的代表性。对外观形状易发生变化者,应分别取样,并装入不同的容器内。
1.中药材和饮片取样法
(1)抽取样品前,应核对品名、产地、规格等级及包件式样,检查包装的完整性、清洁程度以及有无水迹、霉变或其他物质污染等情况,详细记录。凡有异常情况的包件,应单独检验并拍照。
(2)从同批药材包件中抽取供检验用样品的原则:药材总包件数不足5件的,逐件取样;5～99件,随机抽5件取样;100～100件,按5%比例取样;超过1000件的,超过部分按1%比例取样;贵重药材,不论包件多少均逐件取样。
(3)每一包件至少在2～3个不同部位各取样品1份;包件大的应从10cm以下的深处在不同的部位分别抽取;对破碎的、粉末状的或大小在1cm以下的药材和饮片,可用采样器(探子)抽取样品;对包件较大或个体较大的药材,可根据实际情况抽取有代表性的样品。每一包件的取样量:一般药材抽取100～500g;粉末状药材抽取25～50g;贵重药材抽取5～10g。
(4)将抽取的样品混匀,即为抽取样品总量。若抽取样品总量超过检验用量数倍时,可按四分法再取样。
(5)最终抽取的供检验用样品量,一般不少于检验所需用量的3倍,即1/3供实验室分析用,另1/3供复核用,其余1/3留样保存。
2.中药制剂取样法
各类中药制剂的取样量至少为检测用量的3倍,贵重药可酌情取样。
(1)粉状中药制剂(散剂或颗粒剂)一般取样100g,将取出的供试品混匀,然后按四分法从中去除所需供试量。
(2)液体中药制剂(口服液、酊剂、酒剂、糖浆)一般取样数量为200ml,同时须注意容器底是否有沉渣,应彻底摇匀,均匀取样。
(3)固体中成药(丸剂、片剂、胶囊)一般片剂取量200片,未成片前已制成颗粒者可取100g,丸剂一般取10丸。胶囊按药典规定取样不得少于20个胶囊。
(4)注射剂取样要分为2次,配制后在灌装、熔封、灭菌前进行一次取样,经灭菌后的注射剂按原方法进行,分析检验合格后可供药用。已封好的安瓿取样量一般为200支。
(5)其他剂型的中药制剂可根据具体情况随意抽取一定数量作为随机抽样。
中药材分析用样品制备
(1)超声提取法
超声波具有助溶作用,因此可用于样品中待测组分的提取。超声提取较冷法速度快,一般仅需数十分钟即可达到平衡。超声提取过程中溶剂可能会有一定的损失,所以进行含量测定时,应于超声振荡前先称定重量,提取完毕后,放冷至室温,再称重,并补足减失的重量,滤过,取续滤液备用。
超声提取法简便,不需加热,提取时间短,适用于固体制剂中待测组分的提取。应用于药材粉末的提取时,由于提取组分是由细胞内逐步散出来,速度较慢,加溶剂后先放置一段时间,再进行超声震荡提取。
(2)回流提取法
回流提取法是将样品粉末置烧瓶中,加入一定量的有机溶剂,加热进行回流提取的方法。在加热条件下组分溶解度增大,溶出速率加快,有利于提取。回流提取法主要用于固体制剂的提取。提取前应将样品粉碎成细粉,以利于组分提出。提取溶剂沸点不宜太高,对热不稳定或具有挥发性的组分不宜采用回流提取法提取。回流提取法提取速度快,但操作稍繁琐。
(3)连续回流提取法
连续回流提取法适用索氏提取器连续进行提取,操作简便,节省溶剂,蒸发的溶剂经冷凝流回样品管,因其中不含待测组分,所以提取效率高。本法应该选用低沸点的溶剂,如乙醇、甲醇等,提取组分对热应稳定。
(4)萃取法
萃取法是利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度不同,使物质从一种溶剂转移到另一种溶剂中,经过多次萃取,将测定组分提取出来的方法。萃取法主要用于液体制剂中待测组分的提取分离。
萃取用溶剂应根据待测组分的溶解性来选择。待测组分应在其中溶解度大,而杂质应在其中溶解度小。溶质在有机相和水相的分配比越大,萃取效率越高。根据相似相容原理,极性较强的有机溶剂正丁醇等适用于提取皂苷类成分,乙酸乙酯多用于提取黄酮类成分,三氯甲烷分子中的氢可于生物碱形成氢键,多用于提取生物碱类成分,挥发油等非极性组分则宜用非极性溶剂乙醚、石油醚等提取。
水相的pH值可影响弱酸弱碱性物质在两相的分配。酸性组分提取的pH值一般应比其pKa低1～2个pH单位,碱性组分提取的pH值则应比其pKa高1～2个pH单位。
酒剂和酊剂在萃取前应先挥去乙醇,否则乙醇可使有机溶剂部分或全部溶解于水中。
(5)水蒸气蒸馏法
部分具有挥发性并可随水蒸气蒸馏出的组分,可采用水蒸气蒸馏法提取,收集馏出液供分析使用。挥发油、一些小分子的生物碱如麻黄碱、槟榔碱,某些酚类化合物如丹皮酚等可以采用本法提取。用本法提取的组分对热应稳定。
(6)超临界流体萃取法
超临界流体是指当压力和温度达到物质的临界点时,所形成的单一相态,如CO2的临界温度为31℃,临界压力为7390kPa,当压力和温度超过此临界点的时,CO2便成为超临界流体。
最常使用的超临界流体是CO2,因为CO2具有较低的临界温度和临界压力,同时还具有惰性、无毒、纯净、价格低廉等优点。本法适合于中药及其制剂中待测组分的提取分离,目前应用日益广泛。
使用超临界流体萃取仪提取时,将样品置于萃取池中,萃取池应恒定在试验温度下,用泵将超临界流体送入萃取池,萃取完毕后,再将溶液送入收集器中。
影响萃取的因素主要有温度、压力、改性剂和提取时间等。由于CO2为非极性化合物,因此超临界CO2对极性组分的溶解性较差。在提取极性组分时,可在超临界流体中加入适量的有机溶剂作为改性剂,如甲醇、三氯甲烷等。改性剂的种类可根据萃取组分的性质来选择,加入量一般通过实验来确定。
黄芪中黄芪甲苷的含量测定
1.色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(32:68)为流动相;蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
2.对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,即得。
3.供试品溶液的制备
取本品中粉约4g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇40ml,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4h,提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水10ml,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次40ml,合并正丁醇提取液,用氨试液充分洗涤2次,每次40ml,弃去氨试液,正丁醇液蒸干,残渣加水5ml使溶解,放冷,通过D101型大孔吸附树脂柱,以水50ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30ml洗脱,弃去洗脱液,续用70%乙醇80ml洗脱,蒸干,用甲醇溶解并转移至5ml量瓶内,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
4.测定法
精密量取对照溶液10μ1、20μl,供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,测定,以外标两点法对数方程计算,即得。本品按干燥品计算,含黄芪甲苷(C41H68O14)不得少于0.040%。
超临界流体萃取技术
超临界流体萃取是用超临界流体作为萃取剂,从各种复杂的样品中,把所需要的组分分离提取出来的一种分离提取技术。超临界流体萃取技术用于色谱样品的处理中,可从复杂的样品中将预测组分分离提取出来,制备成合适于色谱分析的样品。
超临界流体的密度与液体相近,与液体一样很容易溶解其他物质;另一方面,超临界流体的黏度略高于气体,溶质在超临界流体中的扩散系数比在液体中大得多,传质速率很高,这也有利于物质在超临界流体中的溶解。同时超临界流体的表面张力很小,很容易进入样品基质内,并能保持较高的流速,可使萃取过程在高效、快速和相对经济的条件下完成。
超临界流体萃取大致可以分为以下三步:
①预测组分从样品基体中释放出来,并扩散溶解到超临界流体中;
②预测组分从萃取器转移到收集系统;
③将欲萃取组分与超临界流体分离。
超临界流体萃取广泛应用于从各种香料、草本植物、中草药中提取有效成分。
目前中药分析大都采用色谱法,因此兼具分离和分析的功能,样品经提取后可不经分离直接分析。当有些样品分析前仍需分离纯化和富集时,一般也多采用色谱法,如色谱柱法或固相萃取等方法。固相萃取所用的预处理小柱现已实现商品化,内装的填料除硅胶、氧化铝等吸附剂和大孔吸附树脂外,还有各类化学键合相,如C18、氰基、氨基化学键合相等,可适于各种极性化学成分的分离。预处理小柱一般为一次性使用,方便,但价格稍贵。
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