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基因转染技术的非病毒方法运载介绍

2022.10.26

  1、化学转染法

  (1)DEAE-葡聚糖和polybrene聚阳离子法:带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。

  (2)磷酸钙共沉淀法 :将氯化钙、DNA和磷酸盐缓冲液混合,形成磷酸钙微沉淀 ,附着于细胞膜并经过细胞内吞作用进入细胞质。

  该方法的转化效率通常很低。

  (3)脂质体染法 :脂质体能在体内或体外提供运载外源性遗传物质进入细胞的载体。脂质体介导的基因转移的最大优势在于能在活体内应用。

  2、生物方法

  (1)直接注射法 :将含有DNA的溶液直接注射到肌肉,以引起邻近的细胞摄入DNA链进行表达,在肌细胞中,基因表达可持续数月。

  (2)受体介导的基因转移 :依靠受体介导的细胞内吞途径以转移外源基因。受体介导的基因转移方法是在质粒DNA和某种特异的多肽(配体)之间形成复合体,而这种多肽能为细胞表面的受体所识别。如若将DNA在体内运送至肝内,可以选将DNA和能与肝细胞受体特异结合的去唾液酸糖蛋白质偶联,以便通过细胞内吞过程而被摄入,这种DNA大部分被肝脏所摄取。应用该方法转移的外源基因在活体内的表达持续时间较短,在评估实际应用前景上还存在一些问题。

  (3)精子载体法 :用精子和NDA(吡啶核甘酸辅酶 )-剂孵育,可捕获得DNA。通过受精过程,将外源性基因导入受精卵,大大简化了转基因动物的制备过程。 这项转染方法是才发展出来应用在鱼类转殖的最新技术,它最大有点就是简单方便。

  3、物理方法

  (1)微粒子轰击法(基因枪) :在真空状态下,利用粒子加速器将外面包裹了外源基因DNA的金颗粒或钨粉微颗粒进行加速,打入完整的细胞中,从而使外源基因DNA得以在靶细胞中稳定转化并有可能获得表达。实验结果表明,用这种方法靶基因可在皮肤、肌肉、肝、胰、胃和乳腺等细胞中表达。

  (2)显微注射法:在显微镜下,将DNA经同细胞玻璃针直接注入细胞,该法适合于各种培养生长的细胞,但需要一定的设备和操作技巧。

  (3)电穿孔法:电穿孔通过将细胞暴露在短暂的高场强电脉冲中转导分子。即利用脉冲场将DNA导入培养细胞。电脉冲和场强的优化对于成功的转染很重要。

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