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特异性酯酶：氯乙酸 AS-D萘酚酯酶（NCE）染色实验

2019.4.13

实验方法原理	细胞内酯酶水解合成的底物萘酚酯（一种萘的衍生物）而释放出萘酚，并迅速与重氮盐偶联结果在酶活性部位有明亮色彩的沉淀物出现．
试剂、试剂盒	磷酸盐缓冲液六偶氮化新品红苏木素氨水洗液
实验步骤	一、实验试剂： (一)底物混合液（１）0.067mol/L 磷酸盐缓冲液（PH7.6）（２）六偶氮化新品红（hexoliaed new fuchsin）溶液（新鲜配制） ①溶解新品红（new fuchisn）1g于2mol/L盐酸液25ml中，溶液可长期保存。 ②40g/L亚硝酸钠溶液，4℃保存，每周必须新鲜配制，使用前将等体积新品红溶液和40g/L亚硝酸钠溶液混合，反应1min此液好为六偶氮化新品红 ③氯乙酸萘酚AS－D液：取氯乙酸萘酚AS－D（naphthol AS－D　hcloroacetate）5mg溶于N，N－二甲基酰胺N，N－dimeth for mamide）2.5ml中。 ④将氯化萘酚AS－D溶液2.5ml和六偶氮化新品红0.25ml加至0.067mol/L磷酸盐缓冲液47.5ml中测PH值并调节至7.4不需要即可使用。（二）复染液：取harris苏木素（含少量明矾）复染液100ml，加冰乙酸4ml，混匀。（三）稀氨水洗液：每100ml蒸馏水中加入浓氨水（28%）0.2－0.3ml混匀。二、实验操作： 1. 将己固定好的血片或骨髓片放入底物混合液中，在高温温１育10min后，用流水冲洗． 2. 用复染液复染10min 3. 用稀氨水洗液冲洗玻片直至颜色由红变蓝 4. 迅速用流水冲洗，空气中干燥后油镜检查。三、实验结果判定：阳性反应为红色颗粒．定位于胞浆中，展开
注意事项	l. 氯乙酸萘酚酯酸（NCE）最佳反应PH7.O-7.6之间，它不被氟化钠所抑制． 2. 严格遵照操作规程，如增加温度和PH值可导致氯化乙酸萘酚分解，从而在细胞内产生明显的非特异性酯酶反应。 3. 除本法采用新品红（new fachsin）外还有人选用坚固紫（fast garnet,GBC）或坚固蓝（fast blue ,BBN）展