肿瘤细胞的软琼脂集落培养实验
实验方法原理 |
在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团,称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖,所以具有这种能力,而成熟分化的细胞则不能形成集落。 HL-60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞,在体外无需加刺激因子,可在软琼脂培养基中形成集落。二甲基亚砜是一种细胞分化诱导剂,经二甲基亚砜处理后的HL-60细胞按粒系途径定向成熟分化,同时细胞的增殖力降低,几乎全部细胞丧失了软琼脂中形成集落的能力。 |
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实验材料 | HL-60细胞 |
试剂、试剂盒 | 小牛血清 RPMI1640培养液 台盼兰 琼脂 二甲基亚砜 |
仪器、耗材 | 超净工作台 二氧化碳培养箱 显微镜 培养瓶 吸管 酒精灯 血细胞计数板 多孔培养板 |
实验步骤 |
1. 收集对数生长期的HL-60细胞,先按实验十三测定细胞活力,然后调整细胞浓度,制成300~1 000活细胞/ml 的细胞悬液。
6. 然后移培养板或平皿于CO2培养箱中37℃进行培养。
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注意事项 |
1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上,2)干烤消毒140度2小时以上。 2.消化液(pH7.8)或其它加入液,应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌,分装成支置-20度保存。 3.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上。 4.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天,肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存。 5.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上,如有高温灭菌的应按程序来菌),至少每月一次。 6.进入操作时应注意先清洗双手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往,如果数量较多,肿瘤细胞培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作,瓶与瓶之间应相隔一定的距离,开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧,打开后应用灯先烧口,然后烧盖。
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