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软琼脂克隆化的方法

2022.12.15

软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长,而达到克隆化,具体操作如下:

1.配2.5%的琼脂糖30ml,水浴溶化后,移入45℃水浴中。

2.将117ml完全DMEM液和3ml10倍浓度的DMEM液混合,置45℃水浴预热。

3.将琼脂糖与DMEM液混合,即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液,并加75×108脾细胞。

4.每块平皿加10ml,于室温中凝固。

5.DMEM中的细胞与DMEM—琼脂1:1混合,将细胞琼脂混合物2ml铺于凝固的平板上,使其全部覆盖。

6.放入CO2箱饱和湿度,37℃培养10天。

7.用PBS配制0.6%琼脂糖,于沸水浴溶解后,置45℃,在保温情况下取一试管,迅速加入0.1ml25%羊红血球,0.2ml豚鼠补体,2.7ml0.6%琼脂糖。

8.用3ml琼脂糖—羊红血球混合液覆盖克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。从克隆上部溶解羊红血球的溶血范围,可筛选抗羊红血球Ig。


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