关于siRNA的体外制备的介绍
1、化学合成siRNA
合成siRNA应用广泛，这种方法的得率和纯度都比较高。对合成siRNA还可以进行一系列化学修饰以提高siRNA的稳定性、降低脱靶效应，以及（或者）阻止激活天然免疫反应。多家公司，包括Ambion、Thermo Scientific Dharmacon、QIAGEN和Sigma-Aldrich Proligo等都能提供高质量的合成siRNA。在用于细胞之前，合成的正义和反义siRNA需在体外复性形成双链siRNA（方案1）。
2、利用酶学反应从长链dsRNA生成siRNA
利用重组Dicer酶或者细菌RNase Ⅲ对体外转录获得的长链dsRNA进行酶学消化也可以获得双链siRNA（Yang et al. 2002）。与合成siRNA相比，对长链dsRNA酶消化可以生成不同种类的siRNA，提高了生成功能性siRNA的可能性。然而，体外酶学反应生成siRNA的主要不足之处在于：这些siRNA在使用时不易选择对照。理论上，对照siRNA不应该与实验siRNA具备相同的种子序列。由于体外酶切生成的确切siRNA无从得知，那么也就无法选择精确的对照，因此，无法区分究竟是既定靶标mRNA还是脱靶基因的特定表型表达发生下调。
3、体外转录
利用合成的、含有噬菌体启动子的DNA寡核苷酸模板，经体外转录可以生成siRNA。通常，这一方法通过核酸酶或者核酶消化，确保产物拥有确定的末端以及（或者）5’端单磷酸或者羟基末端。这一方式能够以较低成本快速生成多个不同siRNA，但是风险主要存在于污染的三磷酸RNA会触发天然免疫反应（Kimet al. 2004）。
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