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关于犬小孢子菌的分子生物学介绍

2022.10.23

  分子生物学在各医学领域中的广泛应用推动了人们对微观世界的认识,同时也为广大真菌学工作者提供了新的研究方法。不少真菌学家已开始在分子水平上研究犬小孢子菌的生物学和基因特征,以了解犬小孢子菌的分子生物学特征与致病机制的关系并为临床快速确诊提供实验室依据。就较新研究论述如下:

  Papini将从70只猫狗身上分离得到的犬小孢子菌通过Api-Zym试验对其19种胞外酶进行分析。实验中发现碱性磷酸酯酶、β-葡糖苷酶、脂肪酶(C14)、胰蛋白酶、糜蛋白酶、β-葡糖醛酸酶、α-岩藻糖苷酶不表现活性;而酸性磷酸酶在64例中表现其活性占91%,酯酶(C4)在57例中表现其活性占81%,α-甘露糖苷酶在51例中表现其活性占73%,N-乙酰-β-葡糖胺酶在41例中表现其活性占58%,亮氨酸芳基酰胺酶在35例中表现其活性占50%,质粒脂肪酶(C8)在31例中表现其活性占44%,α-葡糖苷酶在25例中表现其活性占36%,缬氨酸芳基酰胺酶和胱氨酸芳基酰胺酶各在7例中表现其活性占10%,α-半乳糖苷酶在5例中表现其活性占7%。较特殊的β-半乳糖苷酶在6例中表现活性占8%,其在犬小孢子菌中的表现活性是首次报道。有真菌学者研究犬小孢子菌所产生的胞外酶与其致病力的关系,发现角蛋白酶的活性与犬小孢子菌所致的皮肤真菌病临床表现程度呈正相关。 Mignon通过研究感染犬小孢子菌的荷兰猪了解犬小孢子菌的细胞外抗原。应用ELISA技术测定实验组荷兰猪的血样本,并与对照组(注射了纯化31.5kD角蛋白酶的荷兰猪)的血样本进行比较。实验组在感染后第14天和第57天可发现迟发型超敏反应,21天可测到针对天然菌表面抗原的特异性IgG,而未测到抗角蛋白酶的IgG。对照组在注射了纯化31.5kD角蛋白酶的第14天和第57天仅有少数出现迟发型超敏反应。由此可说明犬小孢子菌主要抗原不是31.5kD角蛋白酶。有研究人员通过对兔子进行类似实验得到与以上一致的结论。

  基因水平的研究尚属起步阶段,Charles应用PCR和RT-PCR的方法研究多种真菌的ACT(Actin)的基因序列,希望通过ACT的基因测序以达到快速检测真菌病原菌的目的。经过对多种致病性真菌(包括犬小孢子菌、须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌等)ACT的研究发现犬小孢子菌的ACT基因序列与须癣毛癣菌、红色毛癣菌、絮状表皮癣菌等致病性真菌的基因序列不同,可用于临床快速诊断真菌病原菌。该方法虽可在较短时间内诊断病原菌(48h),但操作繁琐,费用高,实验条件要求较为严格,因此在国内不易推广。而有人认为可应用PCR技术测定标本中犬小孢子菌的几丁质合酶1基因存在与否来快速诊断犬小孢子菌所致的皮肤真菌病,该方法的有效性有待于临床检测。

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