Western Blot实验相关试剂的配制(一)
丙烯酰胺 29g
甲叉双丙烯酰胺 1g
加去离子水,定容至 100ml 调整溶液 pH 值不超过 7.0,置棕色瓶中贮存于室温或4℃。
SDS 10g
蒸馏水至 100ml
50℃ 水浴下溶解,室温保存。如在长期保存中出现沉淀,水浴溶化后,仍可使用。
Tris (MW121.14) 45.43g
超纯水 200ml
溶解后,用浓盐酸调pH至8.8,最后用超纯水定容至250ml,室温下保存。
Tris (MW121.14) 15.14g
超纯水 200ml
溶解后,用浓盐酸调pH至6.8,最后用超纯水定容至250ml,室温下保存。
10% 过硫酸胺(AP)
过硫酸胺 0.1g
超纯水 1.0ml
溶解后,4℃避光保存,保存时间为1周。(可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在EP管中,一次性多装几管,使用时加入超纯水即可)
20%Tween20
Tween20 20ml
蒸馏水至 100ml
混匀后4℃保存。
1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF
PMSF 0.174g
异丙醇 100ml
溶解后,分装于1.5ml离心管中,-20℃保存。
单去污剂裂解液(PMSF)
1mol/L Tris·HCl (pH8.0) 2.5ml
NaCl 0.438g
TritonX-100 0.5ml
蒸馏水至 50ml
混匀后4℃保存。使用时,加入PMSF至终浓度为100μg/ml(0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl)。
RIPA裂解配方
50 mM Tris-HCl pH 7.4
150 mM NaCl
1 mM PMSF (用前加)
1 mM EDTA
1% Triton x-100
1% 脱氧胆酸钠
0.1% SDS
G250 考马斯亮蓝溶液 (蛋白定量专用)
考马斯亮蓝G250 100mg
95%乙醇 50ml
磷酸 100ml
蒸馏水至 1000ml
配制时,先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料,再加入磷酸和水,混匀后,用滤纸过滤,4℃保存。