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Western Blot实验相关试剂的配制(一)

2020.5.25

30%(w/v)丙烯酰胺溶液  

丙烯酰胺             29g

甲叉双丙烯酰胺       1g

加去离子水,定容至 100ml 调整溶液 pH 值不超过 7.0,置棕色瓶中贮存于室温或4℃。 

10%SDS 

SDS                    10g

蒸馏水至             100ml

50℃ 水浴下溶解,室温保存。如在长期保存中出现沉淀,水浴溶化后,仍可使用。

1.5mol/L Tris·HCl (pH8.8)

Tris (MW121.14)      45.43g

超纯水              200ml

溶解后,用浓盐酸调pH至8.8,最后用超纯水定容至250ml,室温下保存。

0.5mol/L Tris·HCl (pH6.8)

Tris (MW121.14)      15.14g

超纯水            200ml

溶解后,用浓盐酸调pH至6.8,最后用超纯水定容至250ml,室温下保存。

10% 过硫酸胺(AP)

过硫酸胺             0.1g

超纯水               1.0ml

溶解后,4℃避光保存,保存时间为1周。(可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在EP管中,一次性多装几管,使用时加入超纯水即可) 

20%Tween20  

Tween20             20ml

蒸馏水至             100ml

混匀后4℃保存。

1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF

PMSF                 0.174g

异丙醇                100ml

溶解后,分装于1.5ml离心管中,-20℃保存。

单去污剂裂解液(PMSF)

1mol/L Tris·HCl (pH8.0)    2.5ml

NaCl                                0.438g

TritonX-100                           0.5ml

蒸馏水至                                50ml

混匀后4℃保存。使用时,加入PMSF至终浓度为100μg/ml(0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl)。

RIPA裂解配方

50 mM Tris-HCl pH 7.4

150 mM NaCl

1 mM PMSF (用前加)

1 mM EDTA

1% Triton x-100

1% 脱氧胆酸钠

0.1% SDS

G250 考马斯亮蓝溶液 (蛋白定量专用)

考马斯亮蓝G250      100mg

95%乙醇             50ml

磷酸                      100ml

蒸馏水至              1000ml

配制时,先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料,再加入磷酸和水,混匀后,用滤纸过滤,4℃保存。


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