Western Blot 实验试剂选购指南（一）
(一)蛋白质电泳
1.请参照常规电泳操作.
2.分子量标准:
可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时,要注意其优点和缺点:
优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率.
缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力.
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(二)蛋白质转印
a) 膜的选择:主要采用 NC膜和PVDF膜,其比较如下:
(尼龙膜和NC膜的特点相似,主要用于核酸杂交)
b) 膜的大小: 请根据胶的面积来确定.
c) 膜的孔径: 0.45um适用一般蛋白质. 0.2um适用小分子蛋白质.
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(三) 蛋白质的显示(大部分实验不需要进行此步操作)
蛋白质染色的染料有很多种,各种的特点均不一样.
(四)免疫检测
有各种不同的免疫检测方法.请注意选择.方法不同,则所需的试剂也不同.如需方便,可选择完整的试剂盒.
A.封闭膜:
这一步会影响结果的成败和背景的强度.常用封闭剂为BSA和Tween20. 脱脂干奶粉不适合用于糖蛋白和生物素标记抗体.
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B.一抗: 根据目的蛋白质选择.单抗或多抗均可.注意已变性蛋白质无法检测,必须采用非变性胶电泳. 我司有 R&D, Genex, Santa Cruz等公司的原装抗体或进口分装抗体.具体请参见免疫学部分产品----第一抗体.
C.标记二抗: 根据一抗的来源选择二抗.
购买信息: 请参见免疫学部分试剂---各种标记抗体
D.底物系统: 采用常规底物或化学发光底物.
(1) 显色法: 常用底物为BCIP/NBT或DAB .此法简单,但灵敏度不高,并难以从膜上去除.
(2) 化学发光法: 目前比较常用的方法.灵敏度较高,检测时可采用X光胶片或CCD成像系统.
不同显色方法产品比较如下:
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综述
