全套病毒RNA m6A甲基化修饰研究工具的使用（一）
如果新冠病毒SARS-CoV-2的大流行对我们有任何启发的话，那么要数对RNA修饰的研究了，此时研究病毒RNA以及其甲基化修饰等功能，显得比以往任何时候都更加重要。 而这是否意味着要研究病毒RNA本身不同的各种突变体或者表观遗传变化如何使这些病毒更灵活和感染力？还是研究从细胞和组织中收集的RNA是怎么对宿主细胞功能的产生影响和致病的？然后，现实告诉我们，这项研究工作几乎是无止境的。
通常，设置实验中最具挑战性的部分之一是每一步实验操作的处理方式。 为了向您提供表观遗传研究的完整解决方案，EpiGentek以试剂盒和信息的形式提供了全套病毒RNA修饰研究的工作流程解决方案，如下图。
首先我们了解一下研究背景：
m6A RNA甲基化和去甲基化循环
m6A RNA的形成是由多蛋白质甲基转移酶复合物调控的，部分由METTL酶调控。最近的研究发现，在哺乳动物中存在这些甲基化酶“写入者”及其相关的去甲基酶“擦除者”，揭示出 RNA m6A甲基化修饰是可逆的，如下图所示。 一个甲基通过METTL3 / 14异二聚体以化学方法加入到腺苷（A）残基的氮6位上，形成了N6-甲基腺苷（m6A）。 然后，m6A可以通过FTO介导的氧化脱甲基作用，逐步转化为N6-羟甲基腺苷（hm6A），随后转化为N6-甲酰腺苷（f6A），最后最终还原为原始腺苷酸（A）。
m6A修饰对RNA病毒生命周期的影响
已知表观遗传修饰会影响人类冠状病毒等RNA病毒的生命周期。据报道，像N6-甲基腺苷（m6A）这样的腺苷甲基化修饰可通过调节病毒帽结构，病毒基因表达，病毒传代，先天传感途径和先天免疫应答来影响某些RNA病毒的生存能力。 m6A的获得或丧失可导致RNA病毒发生重大功能变化，从而改变其宿主细胞的融合/进入，复制，传播，致病强度和免疫逃逸。宿主细胞的m6A转录组在宿主抵抗性能中起作用，在病毒感染后也可能因此而发生改变。
新冠病毒SARS-CoV-2基因组的长度超过29,800个核苷酸，包含50多个潜在的m6A位点，这些甲基化位点的碱基是RNA甲基化酶复合体METTL3 / 14修饰的m6A特定碱基，包括GGACU（T），GGACA ，以及GGACC。因此，新冠病毒SARS-CoV-2 RNA中所有腺苷中有大于 0.64％，或大于0.18％的所有碱基都可能是m6A修饰的。因此，总RNA中的m6A定量和整个转录组的m6A定位对于研究与m6A相关的病毒功能和相应的机制以及确定抗病毒治疗的新靶标至关重要。
