荧光分光光度法测定苯并[α]芘实验步骤
步骤
1、样品萃取
将飘尘样品(玻璃纤维滤膜的尘面朝里折叠后)小心放进索氏提取器的渗滤管中(放时不要让滤膜堵塞回流管)。加入50ml环己烷,置于温度为99℃±1℃水浴中(水面以达到接收瓶高的2/3为宜)连续问流8h。
根据提取液颜色深浅,取全部或将提取液定容到50ml后,取部分置于KD浓缩器中,在70～75℃的水浴中减压浓缩至近干。浓缩管用苯洗三次,每次3～4滴,用氮气吹至0.05ml,以备纸层析用。
2、纸层析分离
在准备好的15cm×30cm乙酰化滤纸30cm长的下端3cm处,用铅笔轻轻地画一横线,两端各留出1.5cm,以2.4cm的间隔将标准BaP与样品浓缩液用玻璃毛细管交叉点样。点样斑点直径不要超过3～4mm。点样过程中用冷风吹干。每个浓缩管洗两次,每次用1滴苯,全部点在纸上。将点完样的层析滤纸挂在层析缸内架子上,加入展开剂(甲醇:乙醚蒸馏水=4:4:1(体积比)),直到纸下端浸入1cm为止。用透明胶纸密封,于暗室中展开2～16h(可根据工作安排,灵活选择展开时间)取出层析滤纸,在紫外分析仪下用铅笔圈出标准BaP斑点以及样品与其高度(R值)相同的紫蓝色斑点范围。
剪下用铅笔圈出的斑点,剪成小条,分别放入5ml离心管中,在105～110℃烘箱中烘10min(或在干燥器中晾干,也可在于净空气中晾干)在干燥器内冷却后,加入丙酮至标线。用手振荡1min后,以300r/min的速度离心2min。上清液留待测量用。
3、样品测定
将标准BaP斑点和样品斑点的丙酮洗脱液倒入1cm的石英池中,在激发、发射狭缝分别为10nm和2nm,激发波长367nm处,测其发射波长402、405、408nm处的荧光强度F。
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