免疫球蛋白G的纯化实验三步骤
虽然亲和层析法是进行特异性抗体纯化的,然而有时这种纯化方式却非必需,或者无法实施进行。在大多数锖况下,运铁蛋白可发生共沉淀或共纯化,能用凝胶滤过层析去除之。
本次实验需要用到的器材有:抗体、SAS、透析膜离心机。
实验简明三个步骤:
1、于4℃不断搅拌下,往2体积的含有IgG的混合物中,逐滴加入1体枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不间断地搅拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 离心20 min。
2、用预冷的33% SAS溶液在漩涡混合器上振荡洗涤沉淀,所用溶液的体积与原含IgG的混合物等体积。
3、在旋涡混合器上温和振荡以将沉淀溶于合适的预冷的缓冲液中(5%~10%的原始体积)。4℃透析IgG溶液48 h以上,期间换3次缓沖液(每次换4 L)。
推荐