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体外诊断试剂中重组人血清白蛋白的应用

2021.3.08

体外诊断（In Vitro Diagnosis，IVD）是指将血液、体液、组织等样本从人体中取出，使用体外检测试剂、仪器等对样本进行检测与校验，按照方法学分为生化诊断、免疫诊断、分子诊断三大类。

体外诊断市场容量非常大，其中免疫诊断中的化学发光技术因其有高灵敏度、宽的线性范围、精确的定量检测、结果稳定、误差小以及操作简便等优点，是子行业中最先进技术，占据免疫诊断70%以上的份额，且每年市场增速超30%。

然而，国内化学发光诊断市场中，罗氏、雅培、丹纳赫和西门子这四大巨头占据70%以上份额，国产品牌仅占很小的份额，大部分国产企业都还在研发的路上。化学发光诊断试剂研发过程中，如何提高灵敏度，增加动力学范围呢？如何避免假阳性、假阴性或其他非特异性干扰呢？如何提高稳定性，减少批间差呢？答案是从上游原料开始严格把关，选择高品质、稳定性好的诊断试剂原料。

白蛋白作为血浆中含量最丰富的蛋白，是激素、脂类和游离脂肪酸等物质的转运载体，又因其可以可逆地结合许多物质，被作为一种重要的原料被广泛用于诊断试剂中。其功效如下：

1）作为稳定剂。白蛋白是一种大分子稳定蛋白，可结合抗体、抗原或酶后使得这些敏感组分在蛋白水解和变性条件下变得更稳定。
2）作为封闭剂。白蛋白可作为免疫反应中的抗非特异性固相干扰阻断剂，用于封闭免疫反应中的非特异结合位点。
3）作为载体蛋白。白蛋白结合的配体包括脂肪酸、阳离子和中性洗涤剂、乙酰胆碱、抗坏血酸、青霉素、甲状腺素、洋地黄素、激素、金属离子、胆红素、糖类等。
4）作为缓冲剂/共混剂。白蛋白可作为一种良好的缓冲液组分，或作为共混试剂，将结合的组分释放到反应混合物中，并可从介质中吸附杂质。
5）作为血浆基质。白蛋白在某些指标检测中，与PBS一起联用模拟人血浆，配制标准对照品溶液，确定标准曲线。

白蛋白包括人血清白蛋白HSA和牛血清白蛋白BSA，其中人血清白蛋白又分天然人血白蛋白pHSA和重组人血清白蛋白rHSA。是不是所有的白蛋白都是优质的诊断试剂原料呢？当然不是！
天然人血白蛋白pHSA是从人血浆经低温乙醇蛋白分离法提取，并经病毒灭活处理制成。人血白蛋白纯度（SDS-PAGE检测）＞95%，除白蛋白外，其中还有多种脂肪酸、脂类、激素及生长因子，且不同厂家不同批次的人血白蛋白存在较大批间差异，用于诊断试剂中，对某些指标检测会造成干扰，同时给诊断试剂成品带来批次波动性。还有很重要的一点，人血白蛋白作为一种临床紧缺药品，不易大批量购买，经常容易缺货。

牛血清白蛋白BSA又称第五组分，通常是屠宰牛肉之后的附属产品，也是通过乙醇沉淀法获得。不同厂家不同地区出产的牛血清白蛋白品质不同，且同一厂家的不同批次的产品品质也差别较大。通常牛血清白蛋白的纯度（SDS-PAGE检测）＜95%，冻干粉颜色偏黄，气味较重，激素及重金属含量较高，用于诊断试剂可能会造成较大的干扰，并且极大的批间差会必然造成诊断试剂成品的品质波动。
禾元生物通过水稻禾元生物通过水稻胚乳细胞特异性高效表达平台Oryz^HiExp表达的植物源重组人血清白蛋白OsrHSA，用于体外诊断试剂中，具有以下优势：