凝集反应(直接凝集反应和间接凝集抑制试验)(2)
２在第1排第1管中加入1∶10稀释伤寒杆菌“Ｈ”血清0.5mL，再加入生理盐水0.5mL于管内,连续吹吸3次，使血清与盐水充分混合，而后吸出0.5mL注入第2管，同样再加入生理盐水0.5mL于管内予以混匀后吸出0.5mL注入第3管。依次类推，稀释到第6管，自第6管吸出0.5mL弃去。此时，自第1管至第6管的血清稀释倍数依次为1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640。第7管不加血清作为对照。
３同法用吸管吸取1∶10稀释伤寒杆菌“Ｏ”血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀释。
４用移液管吸取伤寒杆菌“Ｈ”菌液0.5mL分别加入第1排各管中，此时血清稀释倍数又增加了一倍。
５同法于第2排各管中分别加入伤寒杆菌“Ｏ”菌液0.5mL。
６将各管振荡混匀，放37℃水浴箱中2～4小时或37℃孵育箱中过夜次日取出观察
结果。
【观察结果】
１观察之前切勿摇动试管，以免凝集块分散。
２先观察对照管，此管应无凝集现象，管内液体仍成混浊状态。但如放置时间较长，细菌堆于管底成小圆点状，为阴性反应。
３试验管应自第１管观察起，如有凝集时则于管底有不同大小的圆片状边缘不整齐的凝集物，上液则澄清透明或不同程度混浊。凝集的强弱可用“＋”号表示如下：
“＋＋＋＋”凝集很强，管内液体完全澄清，凝集块完全沉于管底；
“＋＋＋”凝集强，管内液体不完全澄清，稍有轻度混浊，凝集块沉于管底；
“＋＋”凝集中等强度，液体半澄清，凝集块沉于管底；
“＋”凝集弱，管内液体混浊，少量凝集块沉于管底；
“－”不凝集，管内液体和对照管同样混浊，无凝集块。
４最后轻轻振荡各管，观察凝集块的状态，对照管的细菌在振荡时呈烟雾状上升，随即消散，细菌分散仍呈混浊状态。“Ｈ”菌液的凝集块疏松呈棉状，大片沉于管底，轻摇即升起，并极易破碎。“Ｏ”菌液凝集呈紧密颗粒状，沉于管底坚实致密，轻轻振摇不易升起，凝集颗粒较小不易摇碎。
５记录观察的结果并判定凝集效价，通常以能产生明显凝集（＋＋）的血清最大稀释倍数作为该血清的凝集效价。如血清的最低稀释度（即第1管1∶40）仍无凝集，应报该血清效价低于1∶40。如血清的最高稀释度（即第6管1∶1280）仍显完全凝集现象，应报该血清效价高于1∶1280。
（二）间接凝集抑制试验
【原理及意义】
若使可溶性抗原与相应抗体先充分反应再加入有关的免疫微球，因抗体已被可溶性抗原结合，不再出现免疫微球的被动凝集现象，叫间接凝集抑制试验，临床化验检查中常用的免疫妊娠试验就是一种间接凝集抑制试验。
妊娠试验：孕妇尿中绒毛膜促性腺激素（HCG）的含量比正常尿中的高。妊娠尿中加入抗绒毛膜促性腺激素抗体时，由于发生抗原抗体反应的结果，抗体被消耗，此时再往尿中加入乳胶抗原（吸附有人类绒毛膜促性腺激素的乳胶颗粒），不再发生反应，抗原仍呈乳状液体，即为妊娠试验阳性。反之，被检尿中绒毛膜促性腺激素含量甚少（非妊娠尿）不足以把加入的抗体消耗，当乳胶抗原加入后，抗体便与抗原结合发生反应，出现均匀细小颗粒，妊娠试验为阴性。
【材料】
１试剂：吸附有人类绒毛膜促性腺激素的乳胶抗原，抗人类绒毛膜促性腺激素抗体血清，孕妇尿，正常尿。
２器材：黑反应板，玻璃蜡笔，滴管。
【方法】
１取清洁玻片一张，用蜡笔划为二格，注明号码，并分别滴加妊娠尿和正常尿各一滴。
２分别滴加含抗人类绒毛膜促性腺激素抗体血清各一滴，轻轻摇动，充分混匀。
３分别滴加一滴乳胶抗原，缓慢摇动3～5分钟，观察结果：不出现凝集者为阳性，其尿中含有HCG，表示妊娠；出现凝集者为阴性，其尿中不含有HCG，表示未妊娠。
【注意事项】
１试验材料、用具使用前使其温度接近室温（20℃左右）。
２被检尿太混浊，需要过滤。
３尿中有蛋白及血液时，不宜进行此试验。
