概述结核杆菌的抗原、抗体检查的检查过程
结核杆菌抗体检测试剂盒
结核病在疾病发展的不同阶段,T淋巴细胞识别的结核抗原不尽相同。目前发现的诊断结核特异性抗体最常用的是38kD抗原,抗38kD抗体是涂片阳性结核患者中抗体阳性率最高的一种,无疑是迄今为止作为单项诊断结核最好的抗原,是结核病感染中后期检测的重要抗原。16kD抗原适于结核早期感染的患者,可以尽早的检出活动性结核病。本品采用间接法原理检测人血清样本中的38kDa蛋白、16kDa蛋白抗体,用于活动性结核病的临床辅助诊断。
【原理】 斑点反应板上固相结核分枝杆菌Tb-38-16抗原与血清中的结核分枝杆菌抗体形成复合物,胶体金标记的抗人IgG抗体再与复合物结合,形成肉眼可见的红色圆斑点,即为阳性结果,否则为阴性结果。
【检验方法】
(1) 将待测血清样本和试剂盒(特别是试剂盒中的试剂A、B)恢复至室温(25-37℃)
(2) 取出反应板,于反应板孔中滴入试剂A二滴,静置,待试剂A 完全吸入
(3) 用加夜器吸取待测血清样本100微升于反应板孔中,静置,待血清完全吸入
(4) 取下反应板上的蓝色耳盖,滴入试剂B三滴,静置,待试剂B完全吸入
(5) 再滴入试剂A二滴,静置,待试剂A完全吸入,在5分钟内观察反应板孔中现象
【检验结果的解释】
检测结果为阳性者即为结核分枝杆菌抗体检出阳性,阴性者即为结核分枝杆菌抗体未检出。
方法:
结核抗原的检测:用超声波粉碎的卡介苗(BCG)加PPD,并加福氏完全佐剂先后免疫家兔共6次,历时2月余,获得抗血清。经(NH4)2SO4盐析2次后测蛋白含量。用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,滴定工作浓度为1∶80。抗体包被浓度为50μg/ml。用双抗夹心法测CSF中结核抗原。
抗PPD抗体IgG的检测:包被PPD浓度为10 μg/ml,ELISA间接法测抗PPD抗体IgG。实验结果用酶标光度仪测492 nm吸光度[A,曾称光密度(OD)]。所有检测数据经统计学处理后,以A≥0.20为阳性结果。
脑脊液中结核抗原和抗纯蛋白衍化物(PPD)抗体IgG。