双压线性离子阱质谱用于单克隆抗体分子量测定（一）
前言
目前，在对包括癌症在内的各种疾病的诊断和治疗中，单克隆抗体（mAbs）起到了越来越重要的作用，其相关研究发展也十分迅速。不同于传统的小分子药物，单克隆抗体的结构十分复杂，存在多种异构现象，故单克隆抗体结构表征就显得尤为重要。由于生物质谱所具有的“软电离”模式和高灵敏度、高质量精度和宽动态范围等优点，在单克隆抗体分子量测定、蛋白序列测定、翻译后修饰分析及杂质分析等方面，质谱正在起到越来越重要的作用。
离子阱质谱经常被用于未知物的结构解析，以及常规的蛋白序列测定、翻译后修饰和糖链结构解析等。已有实验结果表明，使用LTQ Velos 离子阱质谱可以对小的完整蛋白（16kDa）进行top down 解析[1]；然而，使用离子阱质谱对150kDa 的完整单克隆抗体进行完整分子量测定尚未见报道。
在本文的研究中我们使用Velos Pro 双压线性离子阱质谱，对完整单克隆抗体及其轻重链分别进行了分子量测定。实验结果表明，离子阱质谱也能对150kDa 的完整单克隆抗体进行分子量测定，且不同糖型可得到分辨。
实验部分
样品信息
本次实验使用完整单克隆抗体样品，样品浓度2μg/μL；取部分样品上样至常规液相色谱，经在线脱盐后质谱测定其分子量；另取部分完整单克隆抗体样品经二硫苏糖醇（DTT）对二硫键还原烷基化后上样至LC-MS 系统，分别测定轻、重链分子量。
常规液相色谱方法
色谱仪：Thermo Scientific Accela 600
色谱柱：Thermo BioBasic 8 HPLC（5μm, 2.1mm, 100mm）
上样量：4μL（8μg）
流动相：A: 0.1% 甲酸水溶液，B: 0.1% 甲酸乙腈溶液梯度如下，其中前四分钟为在线除盐过程：
质谱方法
质谱仪：Velos Pro 线性离子阱质谱仪
喷雾电压：3.8 kV
毛细管温度：275 ℃
S-lens：66.8%
Scan Rate：Normal
m/z range：800-3500
In source CID：75eV
AGC target：3e5
数据分析
数据使用ProMass 软件进行去卷积分析。
结果与讨论
Velos Pro 线性离子阱质谱用于完整单克隆抗体分子量测定
图1. LTQ Velos Pro 测定完整单克隆抗体分子量原始谱图
