B-NDG B2m KO plus在蛋白表达分析与抗肿瘤药效研究的应用
背景介绍
B-NDG小鼠（NOD.CB17-PrkdcscidIL2rgtm1/Bcgen）是百奥赛图公司自主开发的，NOD-scid遗传背景的IL2rg基因敲除小鼠，综合了NOD-scid-IL2rg null背景特征，具有重度免疫缺陷表型，缺乏成熟的T、B和NK细胞，是目前国际公认的免疫缺陷程度高的工具小鼠，已被广泛应用于人体免疫系统重建。
人PBMC植入的人源化小鼠是体内分析人体免疫应答的有吸引力的模型。我们先前报道了人 PBMC 可成功植入 B-NDG 小鼠。然而，由于这些小鼠存在严重的异种移植物抗宿主病 (xeno-GVHD)，实验的窗口有限，所以敲除 MHCⅠ 类 β2-微球蛋白 (β2m) 是解决这一问题的有效途径。但据报道，FcRn 是 α 链和 β2m 的异源二聚体，与其他 IgG Fc 受体的不同之处在于其在结构上与 MHCⅠ类分子相关。研究表明，在 β2m 缺陷小鼠中， FcRn 的几种功能受到影响，例如，与同窝正常小鼠相比，新生 β2m 缺陷幼崽在出生时的 IgG 血清水平较低，并且在断奶前蓄积的 IgG 较少 [1,2]。
因此，百奥赛图在B-NDG小鼠的基础上开发了衍生产品B-NDG B2m KO plus 小鼠，一起来瞧一瞧吧~
1、B-NDG B2m KO plus小鼠部分数据展示：
蛋白表达分析
组织病理学切片
B-NDG B2m KO plus小鼠的抗肿瘤药效研究
B-NDG B2m KO plus小鼠——
PBMC免疫系统重建的有力工具
B-NDG B2m KO plus 小鼠在基因敲除鼠 B2m 基因的同时，表达了融合在 FcRn 基因中的 B2m 基因。这种小鼠结合了 B-NDG 小鼠背景同时存在MHC I 类缺失，与野生型小鼠相比，IgG药物在小鼠体内没有表现出代谢差异，有效减缓GVHD反应并延长药效实验的窗口期。该模型可用于研究异种移植抗宿主病的体内机制和治疗药物疗效评价。
MHC-I 类分子的蛋白表达分析
从 B-NDG B2m KO plus、B-NDG、NOD-scid 小鼠 (n=5) 中采集血细胞、脾细胞和骨髓细胞，并通过 MHC I 类 (H-2 Kd) 流式细胞术进行分析。
结果显示：MHC I 类仅在B-NDG，NOD scid小鼠检测到，B-NDG B2m KO plus小鼠未检测到。
T、B 和 NK 细胞的蛋白表达分析新
从 B-NDG B2m KO plus、B-NDG、NOD-scid 和 C57BL/6 小鼠 (n=5) 中采集血细胞、脾细胞和细胞，并用 T、B 和 NK 细胞通过流式细胞术进行分析。
结果显示：在 B-NDG B2m KO plus 和 B-NDG 小鼠中未检测到 T、B 和 NK 细胞。NOD scid 小鼠 未检测到T、B 细胞，而可以检测到NK细胞。在 C57BL/6 小鼠中可检测到 T、B 和 NK 细胞。
B-NDG B2M KO plus 和对照小鼠组织的组织病理学切片
(A) C57BL/6 脾脏结构正常，滤泡界限清楚；
(B) NOD-scid 脾脏显示白髓发育不全；
(C，D) 来自 B-NDG 和 B-NDG B2m KO plus 的脾脏均显示滤泡结构完全丧失；
(E) C57BL/6 胸腺叶结构正常，皮质界限清楚；
(G) NOD scid 小鼠的胸腺叶发育不良，缺乏明确的皮质；
(H) B-NDG 小鼠的胸腺叶严重发育不良，缺乏明确的皮质；
(F) B-NDG B2m KO plus 显示正常解剖位置上无胸腺叶。
PK实验——不同小鼠血浆IgG浓度的测定
用人IgG处理纯合的B-NDG、B-NDG B2m KO小鼠、B-NDG B2m KO plus小鼠和C57BL/6小鼠(n=5)。收集不同时间点的血样进行PK测定。
结果表明，B-NDG和B-NDG B2m KO plus小鼠组PK结果基本一致具有药代动力学特征，与野生型小鼠无差异，而B-NDG B2m KO小鼠组在2天后的时间点无法测定药物浓度。结果表明B-NDG B2m KO plus小鼠有效解决了单纯敲除小鼠B2M基因导致抗体半衰期缩短的问题。
在人PBMC诱导的GvHD模型中，B-NDG B2m KO plus小鼠 vs B-NDG 小鼠新
方法：B2M/FcRn（11 周龄雌性，n=5）和 B-NDG（10 周龄雌性，n=6）小鼠在第 0 天静脉植入来自 3 名健康供体 (D1-3) 的 20M 人 PBMC。根据下表，每周大约两次对 GvHD 的临床体征进行评分。在 Prism 中分析数据。数值表示为平均值±SEM。**: P<0.01.
结论：在人 PBMC 诱导的 GvHD 模型中，与 B-NDG 小鼠相比，B2M/FcRn（B-NDG B2m KO plus） 小鼠显著延长了生存期，同时可延迟 GvHD 的发生并降低其严重程度。
PBMC RKO模型在B-NDG B2m KO plus小鼠中的抗肿瘤功效
方法：B-NDG B2m KO plus小鼠 (n = 7/8)，植入人 PBMC 并接种人 RKO 肿瘤细胞系，用 PD-1抗体进行处理。
结论：利用B-NDG B2m KO plus建立的PBMC免疫重建小鼠模型中PD-1能够有效抑制 RKO 肿瘤生长。B-NDG B2m KO plus小鼠体重的稳定表现出较少的 GvHD 症状。
NCI-H226 CDX 肿瘤模型在 B-NDG B2m KO plus小鼠中进行的 CAR-T 体内疗效研究
CAR-T 疗法在B-NDG B2m KO plus小鼠中的抗肿瘤活性。将人 NCI-H226(1E7) 植入B-NDG B2m KO plus小鼠中。(A) 当肿瘤大小约为 150±50 mm3 时，对小鼠进行分组。此时，使用 CAR-T 细胞 (5E5) 按照图中所示的时间表进行处理。(B) 治疗期间的体重变化。
结果表明：CAR-T 细胞对 B-NDG B2m KO plus小鼠的肿瘤生长有不同的抑制作用。B-NDG 是人 CAR-T 细胞疗效研究的强有力模型。
参考文献
[1] Dilip K. Challa, Ramraj Velmurugan, Raimund J. Ober and E. Sally Ward. FcRn: From Molecular Interactions to Regulation of IgG Pharmacokinetics and Functions[J]. Curr Top Microbiol Immunol 2014，382:249-272.
[2] Asja Praetor，Walter Hunziker. β2-microglobulin is important for cell surface expression and pH-dependent IgG binding of human FcRn [J]. Journal of Cell Science,2002，115:2389-2397.
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