病毒中和实验_固定抗血清－稀释病毒法
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | （以细胞培养为例）：①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10-1~10-8); ②取 0. 6ml不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 标准的抗病毒血清混合； ③再取 0.6ml 不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 已知的阴性血清混合； ④将混合液置 37℃ 水浴1h, 然后取 0. 2 ml 混合液分别接种于细胞已长成单层的 96孔细胞培养板中，每一稀释度接种 5孔，设 5 孔正常细胞对照； ⑤将细胞培养板置 37℃ 、 5% CO2 温箱中孵育，每日观察细胞病变效应 (CPE) 。 ⑥中和试验的病毒 CCID50 的计算：细胞培养中，通常是以病毒的组织半数感染量 (CCID50/单位体积）作为中和反应的终点。而动物试验中，用动物半数致死量 (LD50/单位体积）作为中和反应的终点。中和试验中，抗血清组的 CCID50 与阴性血清组的 CCID50 之差的对数等于或大于2, 才能说明中和试验结果为阳性。 展开 |
| 注意事项 | |
| 其他 | 用中和试验方法鉴定病毒时，将不同稀释倍数的病毒与标准的抗血清 (20个抗体单位/单位体积）混合、孵育，使二者充分反应，然后将混合液接种到敏感宿主体内，观察试验结果。 |
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