高效液相色谱仪检测绞股蓝皂苷含量
高效液相色谱仪检测绞股蓝皂苷含量
1 范围
本标准规定了一种高效液相色谱法（HPLC）法测定保健食品中的五叶皂苷XLIX。
本标准适用于以绞股蓝及其加工制品为主要原料的保健食品中绞股蓝苷XL IX的测定。
2 原理
甲醇提取后，用高效液相色谱法(HPLC)测定样品。根据保留时间，采用外标法对样品进行定性和定量测定。
3 试剂和材料
注：除另有规定外本方法所用试剂均为色谱纯水为GB/t6682规定的一级水。
试剂
甲醇（CH3OH）。
乙腈（CH3CN）。
标准品
绞股蓝提取物XLIX（C52H86O21，CAS编号：94987，08:3）：纯度为99.0%。
标准溶液的配制
绞股蓝皂甙XL-IX标准储备液（5mg/ml）：称取绞股蓝皂甙XL-IX标准品25mg（准确至0.01mg），于60±5℃，40kpa~53kpa减压干燥3h，置5ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，此溶液应储存在-18℃的冰箱中。
绞股蓝皂甙XL-IX标准工作液：取适当配置浓度的绞股蓝皂甙XL-IX标准储备液0.005 mg/ml、0.01 mg/ml、0.02 mg/ml、0.1 mg/ml、0.5 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml，暂时配制。
4 仪器设备
高效液相色谱仪,带有紫外或二极管阵列检测器。
平衡：灵敏度为0.1 mg和0.01 mg。
超声波清洗器：功率为800W。
微孔膜,0.45μm有机相。
5 分析步骤
试样制备
固体试样
取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎、混匀，或取半固态试样混匀（软胶囊称取内容物），准确称取均匀试样0. 5 g （精确至0.0001 g）
置具塞试管中，精密加入甲醇10 mL，密塞，超声处理5 min，冷却至室温，摇匀，过滤膜（0.45 μm，有机相），取滤液，待测。
液态试样
将0.5ml摇匀的样品移入10ml容量瓶中，加入8ml甲醇，超声处理5min，冷却至室温，用甲醇定容至10ml，滤膜（0.45μm，有机相），取滤液检测。
色谱参考条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，柱长度100mm，内径4.6mm，粒径3μm，或相同性能。
流动相：乙腈为流动相a，水为流动相B，梯度洗脱见表1。
表1 流动相梯度洗脱表
时间（min）流速（mL/min）流动相A（％）流动相B（％）00.52575150.53565350.54555400.54555410.52575
检测波长为203nm。
柱温：40 °C。
系统适用性
根据绞股蓝皂甙XL-IX的峰值计算，理论塔板数不少于10000个。
标准曲线的制作
将标准曲线以10％L标准系列溶液(3.3.2)的浓度、峰面积作为纵坐标的峰面积和作为横向坐标的标准工作溶液中的绞股蓝SAPoninsXLIX的浓度绘制标准溶液液相色谱图见附录a图1 ）。
试样溶液的测定
将10％L样品溶液注入高效液相色谱(HPLC)以表征保留时间并记录峰面积。根据标准曲线，获得待测溶液中绞股蓝提取物XLIX的浓度（参见附录A中的样品溶液的液相色谱图）。
