高效液相色谱仪检测保健食品中红景天苷含量
1 范围
建立了以红景天为主要原料的高效液相色谱法测定保健食品中红景天苷的方法。
本方法适用于保健食品中红景天苷和保健食品中酪醇的测定。
2 原理
以0.001 mol/L醋酸铵甲醇为流动相(8020)，甲醇提取样品。样品经高效液相色谱(HPLC)和紫外检测器检测。根据保留时间，采用外标法对样品进行定性和定量测定。
3 试剂和材料
除非另有规定本方法所用试剂均为分析纯水为GB/T6682规定的一级水。
试剂
乙酸氨（CH3COONH4）。
甲醇（CH3OH）：色谱纯度。
甲醇(CH3OH)。
试剂配制
乙酸铵溶液（0.01mol/L）：称取0.77g乙酸铵，加水适量溶解，加水至1000ml，在水相中经0.45微孔膜过滤后备用。
标准品
唾液侧（C14H20O7）：纯度为98%。
酪氨酸（C8H10O2）：纯度（>98%）。
标准溶液的配制
红景天苷标准储备液（2.0mg/mL）：准确称取红景天苷标准品0.02g于10mL量瓶中，用甲醇（3.1.2）溶解并稳定至刻度..好好摇。
红景天苷标准工作液：用甲醇（3.1.2）稀释红景天苷标准储备液（3.4.1），制备一系列标准溶液。标准系列的浓度为0 mg/ml、0.01 mg/ml、0.02 mg/ml、0.05 mg/ml、0.20 mg/ml、0.50 mg/ml，均为使用时配制。
酪醇标准储备液（2.0mg/mL）：精密称取0.02g酪醇标准品溶于10mL容量瓶中，溶于甲醇（3.1.2）中，定容至刻度，摇匀。
系统适用溶液：准确吸取红景天苷标准储备液（3.4.1）和酪醇标准储备液（3.4.3）于10ml容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀释至刻度，摇匀。
4 仪器设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器(UV)。
超声波清洗器。
分析天平：灵敏度为0.01 mg，0.1 mg。
5 分析步骤
试样制备
固体样品：20多片或胶囊样品被粉碎和混合。25 mL瓶中加入适量红景天苷2.5mg，加入甲醇(3.1.3)20 mL，超声提取30 min，冷却至室温，甲醇体积(3.1.3)固定混合后用0.45um滤膜过滤，用高效液相色谱法分析。
液体样品：准确吸收含唾液的样品2.5mg，用甲醇（3.1.3）将样品的体积固定在25mL容量瓶中。混合后用0.45um滤膜过滤，进行液相色谱分析。
色谱参考条件
柱：C_（18）柱，柱长250mm，内径4.6mm，填料直径5，m，或等效性能柱；
流动相：醋酸铵溶液（0.01mol/L）-甲醇（80+20）；
流速：1.0 mL/min；
柱温：25 ℃；
检测波长：215 nm；
进样量：10 mL。
系统适用性试验：取系统适用性溶液（3.4.4）10mL，注入液相色谱法，记录色谱图..红景天苷峰与酪蛋白峰的分离度应大于1.5..
标准曲线的制作
将标准系列工作液（3.4.2）分别注入高效液相色谱（hplc）中，测定相应的峰高或峰面积。以标准工作液浓度为横坐标，峰面积或峰高为纵坐标绘制标准曲线。
试样溶液的测定
将样品溶液(5.1.1或5.1.2)注入高效液相色谱法(HPLC)。用保留时间确定峰面积或峰高，并根据标准曲线测定红景天苷的浓度。
6 分析结果的表述
试样中红景天苷含量按式（1）计算:
C ×V
X = × 100
m
式中：
红景天苷在x样中的含量以毫克每100克或毫克每100毫升（mg/100克或mg/100毫升）为单位。
C-样品溶液中红景天苷的浓度，以毫克/毫升为标准曲线，测定样品溶液中红景天苷的浓度；
V—样品体积，单位为毫升（ml）；
M-样品数量（克或毫升）（g或mL）；）
100—单位转换。
计算结果用在重复条件下获得的两个独立测量值的算术平均值表示并保留三个有效数字。
7 精密度
在重复性条件下两个独立结果的绝对差不超过算术平均值的10%。
8 其他
红景天苷的检出限为50mg/g，样品重量为1g，体积为25ml。
