细胞周期碘化丙啶红色荧光流式细胞分析试剂盒使用说明
主要用途
YIJI细胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）红色荧光流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定细胞中DNA结合碘化丙啶染料程度，来定量DNA含量，以进一步获取细胞周期分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞（动物、人体、植物、昆虫等）的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，分辨率高，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料，借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰（sub-G1）细胞群。
产品内容
YIJI清理液（Reagent A） 100毫升
YIJI固着液（Reagent B） 100毫升
YIJI缓冲液（Reagent C） 50毫升
YIJI染色液（Reagent D） 2毫升
产品说明书 1份
保存方法
保存YIJI缓冲液（Reagent C）和YIJI染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent D）避免光照，有效保证6月
用户自备
HANKS平衡盐溶液（GMS12022）或PBS缓冲溶液（GMS12033）：用于清洗细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（GMS12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
（微型）台式离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。移出500微升YIJI缓冲液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管，加入20微升YIJI染色液（Reagent D）混匀后标记为YIJI染色工作液，置于暗室里，避免光照。然后进行下列操作。
准备1瓶25cm2细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达70％（约1百万细胞数）
小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集漂浮细胞）
加入2.5毫升用户自备的HANKS平衡盐溶液或PBS缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面
小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升锥形离心管
加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到细胞培养瓶，铺满整个培养平面
置入37℃培养箱孵育1分种
振动培养瓶，使细胞脱落，然后加入5毫升用户自备的完全细胞培养液
移入到上述15毫升锥形离心管（悬浮细胞从这一步骤开始）
放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
小心抽去上清液
加入1毫升预冷的YIJI清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管，混匀
移入到1.5毫升离心管
放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）
小心抽去上清液
加入1毫升预冷的YIJI固着液（Reagent B），混匀
放进4℃冰箱里孵育16小时
放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）
小心抽去固着液
加入500微升YIJI染色工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群
在暗室里37℃培养箱里孵育45分钟
移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测）
即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光出现红色荧光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以上
注意事项
本产品为100次操作
确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞
可用35mm培养皿或6孔培养板，细胞总量不得少于30万
操作时，须戴手套
孵育时，必须避免光照
建议细胞染色完成后，即刻进行细胞流式仪分析。如果放进4℃冰箱里待测，不要超过1周
细胞流式仪分析前，须混匀内容物，避免细胞成团
细胞检测量不得少于10000个
告知流式仪技术员有关细胞类型
本公司提供系列细胞周期分析试剂产品
质量标准
本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定荧光清晰
