免疫沉淀的方法步骤
说到实验，毕竟是“说”，重要的是动手“做”。其实我们所发布的一些过程步骤等相当于说明书，我们能够给出的是一些知识与提醒注意，一个实验是不能看会的，所以朋友们可通过来了解，需要的朋友们可以自己动手来实践的。我们今天说的这个实验呢是免疫沉淀的实验，过程还是比较简单的。
免疫沉淀一般用于分析抗原的生化特性，因此要求抗原的纯度尽可能高。抗原和抗体的相互作用与其各自的内在性质有关，故提高该技术信—噪比*容易的方法是降低本底。
一季度实验：我们今天来看免疫沉淀的方法步骤。
1、表面标记或生物合成标记的细胞在裂解缓冲液中于4℃放置1 h 后，再于4℃3 000 g 离心10 min 除去细胞核，然后将所得上清在10000 g 离心1 min。
2、一次性对上清进行预处理，每200 μl 上清加入10 μl 活化后被淬灭的琼脂糖对照。在旋转揺床中室温揺荡2 h 或在4℃经过一个晚上。200 g 离心1 min，保留上清。
3、在1.5 ml 的微量离心管中加满裂解液室温作用10 min，对其进行预包被。吸去液体后，加入105~106 cpm 的含抗原的放射性标记上清，加稀释缓冲液使终体积为200 μl。
4、加入10 μl 1：1的抗体-Sepharose偶联物胶浆/稀释缓冲液。4℃在旋转摇床中摇荡1. 5~3 h，一直保持Sepharose呈混悬状。
5、Sepharose偶联物依次用1 ml 下面列出的缓冲液洗涤。毎次洗完后，200 g 离心5 min 或微量离心5 s。以细头的巴斯德吸管小心吸去上清，仅在沉淀的上面留10 μl 的液体。在第4次洗涤后，离心甩下管壁所有残余液滴并将其吸去，沉淀上仅留下约 10 μl。
6、加入20~50 μl SDS样品缓冲液。由于样品缓冲液比重大于洗涤缓冲液，它可渗透到Sepharose中，不要用旋涡混合器旋起SEpharose，以免使之粘附在缓冲液液面以上的管壁。盖紧盖子，于100℃保温5 min。
7、用旋涡混合器混匀，200 g 离心或微量离心5 s。将上清加样于凝胶以SDS-PAGE分析，使用增感屏进行放射自显影或荧光自显影或检测标记蛋白质。
