中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
实验原理
偶氮偶联法（Kaplow法）：中性粒细胞胞浆中的碱性磷酸酶在pH 9.2-9.8缓冲液中，能水解磷酸萘酚钠，并释放出磷酸与萘酚。再以重氮盐与萘酚偶联成不溶性有色偶氮染料沉淀于胞浆中。
实验方法
材料：
1. 10%甲醛甲醇固定液
甲醛 10 ml
甲醇 90 ml
20C ~80C避光保存。
2. 丙二醇缓冲液
(1) 贮备液(0.2 mol/L)
2-氨基-2甲基-1，3-丙二醇 10.5 g
蒸馏水 加至500 mL
溶解后保存冰箱内。
(2) 应用液(0.05 mol/L，pH 9.75)
0.2 mol/L贮存液 25 mL
0.1 mol/L盐酸 5 mL
蒸馏水 加至100mL
3. 基质孵育液(pH9.5-9.6)–磷酸萘酚钠20 mg溶于0.05 mol/L丙二醇缓冲液20 mL，再加坚牢紫酱GBC(或重氮坚牢蓝)20 mg混合后用滤纸过滤，用前临时配制。
4. 1 g/L苏木素复染液 取1g苏木素加到蒸馏水500 mL中，加热煮沸，使苏木素溶解，再加入蒸馏水500 mL、碘酸钠200mg、硫酸铝钾50 g，充分混匀，置棕色玻璃中室温保存，使用前过滤。
方法：
1．固定 新鲜干燥的涂片用10%甲醛固定注液固定30s，蒸馏水轻轻冲洗30～60s，待干。
2．显示 把涂片浸入基质孵育液中，在室温下温育10～15min(冬季放孵育箱温育)。蒸馏水冲洗2min。
3．复染 置苏木素复染液复染5～8min，蒸馏水冲洗1～2min，待干，镜检。
实验结果计算
坚牢蓝RR阳性为紫黑色颗粒，
坚牢紫酱GBC阳性为棕红色沉淀。
（-） 0分：阴性反应，胞浆中无阳性染色颗粒。
（+） 1分：胞浆中含有少量颗粒或呈弥散浅红色（或弥散紫色）。
（++） 2分：胞浆中含有中等量颗粒或弥散受色。
（+++） 3分：胞浆中有丰富的颗粒或弥散深色，胞核清晰。
（++++）4分：有极丰富的粗大颗粒，充满胞浆，或弥散深色，胞核不清晰。
NAP积分：
计数100个成熟中性粒细胞，按其反应强度分级，各级百分率与其级数乘积的总和，即为积分。
例如： NAP反应结果（%）
（-） （+） （++） （+++） （++++）
20 40 20 15 5
积分=（0×20）+（2×20）+（3×15）+（4×5）=145
阳性率为80%。
注意事项
1.坚牢蓝等重氮盐的质量好坏是NAP染色成败的关键；
2. 基质孵育液必须临用前新鲜配制；
3. 所用的片子要新鲜。固定后一般在一周内染色。做NAP染色时，最好选择其他患者的片子作为阳性对照；
4. NAP染色以阳性率及积分报告结果。
