牛乳中黄曲霉毒素M1的测定
1.奶产品中黄曲霉毒素M1的限量我国GB 2761-2011 《食品安全国家标准 食品中真菌毒素的限量》中明确规定牛乳中黄曲霉毒素M1的限量为0.5µg/kg，与美国、日本一致，欧盟成员国以及与欧盟有贸易部分国家相对严格，为0.05µg/kg，而欧盟对婴幼儿配方食品，包括婴幼儿配方牛奶则限量0.025µg/kg。
2.黄曲霉毒素M1的检测方法 目前现有黄曲霉毒素M1检测方法有薄层色谱法、酶联免疫法、荧光光度法、液相色谱法、液质联用法等。我国现行有效的标准有GB 5413.37-2010《食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定》、GB 5009.24-2010《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定》、GB/T 23212-2008《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-荧光检测法》、SN/T 1664-2005 《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的测定》等。牛乳中黄曲霉毒素M1的测定主要推荐使用GB 5413.37-2010中的第一法(液质联用免疫亲和层析净化法)和第二法(高效液相色谱免疫亲和层析净化法)。这两种方法都适用，但从日常检测经验来看，液相法定量方面优于液质法，且操作相对简单、仪器普及率高，牛乳中黄曲霉毒素M1的测定推荐使用第二法。
3.液相色谱免疫亲和柱净化法1)样品前处理
A准确称样:牛乳取50 mL(g)以上,奶粉称取10 g左右，取样量一定按照标准要求操作。
B复原：奶粉需用50℃温水50 mL复溶，完全溶解，不能有结块，冷却至室温后定容至100 mL。
C离心去脂：样液在4 ℃下以10000转/min转速下冷冻离心15 min，完全去除脂肪，吸取清液，操作过程中不得混入脂肪。
D净化、浓缩：应注意冷藏保存的免疫亲和柱需恢复至室温，并检查柱效，柱效应大于80 %，且上样过程中免疫亲和柱不能流干;流速一般控制在2-3mL/min;水洗后需抽干，用3mL甲醇洗脱收集，氮气吹至近干，用10%乙腈水溶液定容至1mL。
2)色谱条件
色谱柱： C18 4.6×150mm,3.5-5Micron 。
流动相：乙腈-水(25：75)
流速： 0.8ml/min 。
进样量：30.0 uL。
柱温：25℃。
检测器：荧光检测器;
激发波长365nm，发射波长435nm;
图1黄曲霉毒素M1标样图谱
图2 牛乳样品中黄曲霉毒素M1图谱
3)能力验证中注意事项
样品贮存：拿到能力验证考试样后，如果不马上做应放入冰箱4°C保存;
标准物质：应使用有证标准物质，biopure(ROMER)、色谱科(SUPELCO)等有证标准溶液都可以，贮备液用乙腈配置，工作液标样直接用流动相配制;
洗脱步骤：免疫亲和柱的使用按照各厂家说明书操作。洗脱液一般使用色谱纯的试剂。
样品质控：1)添加回收;2)实物标样;
取样：离心后取清液时，注意不要将离心后的脂肪层混入。
浓缩：注意氮吹的流量和温度，氮气流量不可太大。
阳性样本：日常检测中留意保留阳性样本，作为质控参考。
