红细胞抗体检测方法的比较
关键词： 红细胞抗体；CAT；MPT 中图分类号 R446.62 血型血清学检测红细胞同种抗体对避免临床溶血性输血反应非常重要。笔者用盐水法、酶法、间接抗球蛋白试验(IAGT)、手工凝聚胺法(MPT)和柱凝集技术(CAT)对5种Rh抗体、41份阴性血清、5份病人Rh抗血清和部分IgM抗体进行检测比较。现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 BioVue测试系统(美国强生)：Bliss试剂，BioVue卡(抗IgG,C3d)，筛选细胞(1号CCDee，2号ccDEE,3号ccdee)；凝聚胺试剂盒(台湾Baso公司)；5种Rh抗血清(中国医学科学院输血研究所、西京医院)；抗-M、抗-N、抗-P1(北京市红十字血液中心)；抗-A、抗-B、抗球蛋白血清(长春生物制品研究所)；菠萝酶粉(上海市血液中心)；5份已知鉴定病人阳性抗血清分别含有：抗-D，抗-c与抗-E，抗-C、-e与抗-Ce，抗-c、-E与抗-cE，AIHA温(－20℃，3～5年)；41份抗体阴性血清来自于经凝聚胺筛检阴性的病人血清(4℃，1～3d)。 1.2 CAT法 按测试系统要求操作，在微柱反应腔内加入Bliss试剂50μl、4%红细胞悬液10μl和对应的各种倍比稀释抗血清或抗体40μl，于37℃孵育10min，离心5min，看结果。 1.3 MPT法 按试剂盒说明书操作，但非特异性凝集消失时间以20s内为标准［3］。 1.4 盐水法、酶法和IAGT法 参照文献［4］进行操作。 1.5 灵敏度测定 用抗体血清与相应红细胞反应出现1＋凝集反应时的抗体稀释度表示。 2 结果 2.1 室温盐水法和MPT法检测IgM 见表1。 表1 两种方法测定IgM抗体灵敏度及单一抗体所需时间
| 盐水法 | MPT | |
| 抗-A | 256 | 1024 |
| 抗-B | 512 | 2048 |
| 抗-M | 16 | 64 |
| 抗-N | 16 | 32 |
| 抗-P1 | 4 | 8 |
| 阴性对照 | 0 | 0 |
| 时间(min) | 10 | 15 |
2.2 不同方法检测IgG类Rh抗血清灵敏度 见表2。 表2 不同方法检测IgG类Rh抗血清灵敏度及 单一抗体所需时间比较
| 酶 | IAGT | MPT | CAT | |||||||||
| ① | ② | ③ | ① | ② | ③ | ① | ② | ③ | ① | ② | ③ | |
| 抗-D | 16 | 16 | 0 | 16 | 16 | 0 | 64 | 64 | 0 | 1024 | 1024 | 0 |
| 抗-C | 4 | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 64 | 0 | 0 | 128 | 0 | 0 |
| 抗-c | 0 | 2 | 2 | 0 | 2 | 2 | 0 | 8 | 8 | 0 | 16 | 16 |
| 抗-E | 0 | 4 | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 16 | 0 |
| 抗-e | 4 | 0 | 4 | 4 | 0 | 4 | 16 | 0 | 16 | 32 | 0 | 32 |
| 阴性对照 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 时间(min) | 30 | 30 | 30 | 65 | 65 | 65 | 10 | 10 | 10 | 20 | 20 | 20 |
注：①～③代表1～3号筛选细胞2.3 不同方法检测5名病人血清中抗体效价比较 见表3。 表3 不同方法检测5名病人血清抗体效价比较
| 病例 | 抗体类型 | 酶 | IAGT | MPT | CAT | ||||||||
| ① | ② | ③ | ① | ② | ③ | ① | ② | ③ | ① | ② | ③ | ||
| 1 | 抗-D | 64 | 64 | 0 | 64 | 64 | 0 | 128 | 128 | 0 | 4096 | 4096 | 0 |
| 2 | 抗-c与抗-E | 0 | 16 | 8 | 0 | 16 | 8 | 0 | 32 | 16 | 0 | 128 | 32 |
| 3 | 抗-C、-e与抗-Ce | 16 | 0 | 4 | 16 | 0 | 4 | 32 | 0 | 8 | 128 | 0 | 32 |
| 4 | 抗-c、-E与抗-cE | 0 | 8 | 2 | 0 | 8 | 2 | 0 | 16 | 8 | 0 | 128 | 32 |
| 5 | AIHA(温) | 2＋ | 2＋ | 2＋ | 3＋ | 3＋ | 3＋ | 3＋ | 3＋ | 3＋ | 3＋ | 3＋ | 3＋ |
| 阴性 对照 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
注：①～③代表1～3号筛选细胞 2 讨论
作为筛检IgG抗体的酶法和IAGT法，是传统经典方法，早已常规应用。近几年发展起来的MPT法，是利用低离子溶液和凝聚胺减少红细胞表面的阳离子层及zeta电位，促进IgG与红细胞结合，缩短红细胞之间的距离，而使红细胞凝集［1］。CAT法是在微柱中进行，柱内预先装有玻璃微珠和不同介质(依据实验要求而定)、红细胞和相应抗体反应后离心，凝集的红细胞被阻滞于玻璃微柱上层，游离的红细胞存于柱底，用肉眼即可判读，且结果稳定［2，3］。而其它4种方法的结果有时则需用显微镜进一步判读。CAT法易于操作和标准化，可减少实验误差，所需标本量少，约为其它4种方法用量的1／3～1／2；CAT法实验时间是IAGT的1／3，相对于IAGT法可以节约67%的人力；MPT法筛选抗体时间虽然短于CAT法数分钟，但MPT法需用盐水法、酶法、IAGT法对在筛检出的阳性结果进行抗体类别的鉴定。抗体灵敏度测定：CAT法比MPT法要高出16～32倍，比IAGT法、酶法要高出8～64倍，MPT法比IAGT法、酶法高出2～16倍。所以，为了避免溶血性输血反应的发生，尽可能采用MPT法和CAT法进行血清学筛检。当用MPT法不能检出红细胞抗原抗体时，可用CAT法。
对于MPT法和CAT法，一定要操作标准化。既要保证血样新鲜无污染，又要掌握红细胞悬液浓度在3%～5％，还需注意当红细胞被抗体严重包被及血清蛋白异常时，CAT法在孵育过程中出现凝块等现象。这些情况均可导致实验结果出现假阴性或假阳性。
参考文献
1，杨世英、魏庭萱.手工凝聚胺技术在临床交叉配血、抗体筛选及输血反应中的应用.中国输血杂志，1996，9：49
2，Reis KJ,Chachowski R,Cupido A,et al.Column antihuman globulin test.Transfusion，1993,33(8):639
3，Reisner RK,Gauthier CM,Williamson KR,et al.Comparision of patient ABO/Rh/K typing by a column agglutination system and convertional tube methods.Transfusion，1993.33(Suppl):18
4，叶应妩、王毓三.全国临床检验操作规程.第2版.南京：东南大学出版社，1997：98，108
